Реакции на определение холестерина

Анализ крови на холестерин: подготовка и расшифровка результатов

Даже тот, кто далек от медицины, знает, что повышенный холестерин – это плохо. Статьи в популярных журналах рассказывают, как сбалансированное питание помогает снизить уровень холестерина, мы называем фастфуд «холестериновой едой» и, пожалуй, каждый из нас слышал, как важно время от времени делать анализ крови на холестерин. Расскажем подробнее об этом веществе: зачем оно нужно нашему организму и чем опасно повышение или понижение его уровня?

Типы холестерина и показания к назначению анализа

Холестерин, или холестерол, относится к липидам. Примерно 80% этого вещества производится в печени, остальное же поступает из продуктов питания. Холестерин – жизненно важный «компонент» нашего тела, это соединение активно участвует в синтезе некоторых половых гормонов и желчи, а также придает упругость и прочность клеточным мембранам.

Холестерин в организме присутствует в виде фракций – триглицеридов – липопротеинов высокой плотности (ЛПВП) и липопротеинов низкой плотности (ЛПНП).

  • ЛПНП – это «плохой холестерин», однако такое название вовсе не означает, что он действительно так уж плох и опасен. Он, например, нейтрализуют опасные для организма токсины. Однако, если уровень этого соединения слишком велик, он действительно образует склеротические бляшки.
  • Триглицериды, которые входят в состав липопротеинов очень низкой плотности (ЛПОНП), участвуют лишь в образовании холестериновых бляшек.
  • ЛПВП иногда называют «хорошим холестерином», так как это вещество растворяет холестериновые бляшки на стенках сосудов. Функция ЛПВП – доставка холестерина с окраин организма обратно в печень для дальнейшей переработки. «Хороший холестерин» также участвует в строительстве клеточных мембран, обмене витамина D и синтезе ряда гормонов.

Холестерин – это один из основных показателей происходящего в нашем организме жирового обмена. Анализ крови на холестерин играет значительную роль в диагностике такого заболевания, как атеросклероз, и определении риска развития ишемической болезни сердца. Показаниями для проведения анализа являются также некоторые эндокринные патологии и заболевания печени и почек, ожирение, диабет. Исследование проводят для контроля эффективности терапии статинами и другими гиполипидемическими препаратами. И, наконец, даже здоровые люди должны время от времени делать такой анализ, чтобы вовремя заметить изменения в уровне этого соединения и скорректировать диету. Для получения полной картины необходимо измерять не только общий уровень холестерина, но и уровень всех его видов в отдельности. Соотношение ЛПНП, ЛПВП И ЛПОНП может сказать о состоянии здоровья больше, чем уровень холестерина в крови в целом.

Подготовка и проведение

Анализ крови на холестерин – очень распространенная процедура. Его можно сдать в любой медицинской лаборатории по предварительной записи. Поскольку он требует некоторой подготовки, лучше запланировать его заранее.

Подготовка
Современные технологии позволяют достичь исключительной точности результатов. Однако для того чтобы исключить возможность ошибки, сам пациент должен придерживаться некоторых правил. Еда, напитки, алкоголь и никотин, прием некоторых лекарств – все это может оказать влияние на результаты и исказить данные. Поэтому сдавать анализ крови нужно натощак (последний прием пищи – не менее чем за 12 часов до посещения лаборатории). За 2–3 дня до сдачи анализа нужно исключить из меню все жареное и жирное, отказаться от алкоголя и курения, перестать принимать биодобавки. Обязательно скажите врачу, пьете ли вы лекарства, какие и как часто. Антибиотики, витамины, гормоны, фибраты, статины, мочегонные и гипотензивные препараты, нестероидные противовоспалительные средства и многие другие медикаменты оказывают существенное влияние на уровень холестерина.

Как сдавать
Для определения уровня холестерина исследуется кровь из вены. Для пациента вся процедура занимает считанные минуты, а результат можно забрать через несколько часов или на следующий день. В бланке будет указан уровень общего холестерина и его фракций. Обычно холестерин измеряется в ммоль/л либо мг/дл (для пересчета в мг/дл число в ммоль/л следует умножить на 38). Помимо результатов вашего анализа в бланке будет указано ориентировочное нормальное значение.

Методики исследования
Существует очень много методов для определения концентрации холестерина в крови как химических, так и ферментативных. Чаще всего анализы проводятся ферментативным методом. Химический же, несмотря на точность, весьма трудоемок.

Также сегодня в аптеке можно купить индивидуальные тест-системы для определения уровня холестерина в домашних условиях, но их точность совершенно несопоставима с точностью результатов, полученных в лаборатории. На действие этих тестов могут влиять многие факторы внешней среды – например, повышенная температура или влажность.

Расшифровка результатов

Как мы уже выяснили, нельзя утверждать, что холестерин – абсолютное зло, и чем ниже его уровень в крови, тем лучше. Более того, с медицинской точки зрения слишком низкий уровень холестерина несет даже больший риск для здоровья, чем слишком высокий. Показатели должны находиться в пределах нормы.

Норма содержания холестерина в крови
У здорового человека норма концентрации холестерина в анализе крови колеблется в пределах от 3,1 до 5 ммоль/л, содержание триглицеридов – от 0,14 до 1,82 ммоль/л, а уровень ЛПВП в среднем должен быть не менее 1 ммоль/л. Понятие нормы для женщин и мужчин несколько различается: для женщин нормальный уровень ЛПВП равняется 1,42 ммоль/л, а уровень ЛПНВ колеблется в пределах от 1,9 до 4,5 ммоль/л. Для мужчин нормальный уровень ЛПВП –1,68 ммоль/л, а уровень ЛПНВ колеблется в пределах от 2,2 до 4,8 ммоль/л.

Как бы там ни было, содержание этого соединения свыше 5,2 ммоль/л означает необходимость более тщательного и углубленного анализа липидного профиля пациента.

Холестерин повышен
Допустим, анализ показал, что уровень холестерина у вас выше нормы. Это характерно для таких болезней, как:

  • врожденная гиперлипидемия;
  • патологии гепатобилиарной системы;
  • рак поджелудочной железы;
  • сахарный диабет;
  • гипотиреоз;
  • патологии почек.

Иногда высокий уровень холестерола является следствием нездорового образа жизни – у людей, страдающих алкоголизмом и ожирением, а также у тех, кто слишком увлекается жирной едой, этот показатель приближается к верхней границе нормы и иногда даже пересекает ее.

И, наконец, при беременности также нередко отмечается незначительное повышение уровня холестерина.

Холестерин понижен
Если анализы показали пониженный холестерин, это также может быть признаком некоторых заболеваний:

  • гиполипопротеинемия;
  • гипертиреоз;
  • рак печени;
  • цирроз печени, особенно на поздних стадиях;
  • хроническая анемия;
  • патологии костного мозга;
  • хроническая легочная патология.
Читайте также:  Холестерин у женщин 48 лет

Понижение концентрации холестерина характерно также для острых инфекций, сепсиса и обширных ожогов. Погрешности в диете тоже могут снизить этот показатель – у людей, чрезмерно увлекающихся голоданием и очень строгими диетами, а также у тех, кто употребляет слишком много жирных кислот (омега), часто наблюдается низкий уровень холестерола.

Неважно, что показал анализ крови – ни в коем случае не следует пытаться поднять или понизить уровень холестерина своими силами, без консультации с врачом. В абсолютном большинстве случаев у высокого или низкого содержания этого соединения есть совершенно конкретные причины – заболевания, которые надо лечить.

Если хо­лес­те­рин у вас в нор­ме, это пре­крас­но – од­на­ко не сле­ду­ет ду­мать, что он оста­нет­ся та­ким всег­да. Обыч­но с воз­рас­том от­ме­ча­ет­ся тен­ден­ция к по­вы­ше­нию его уров­ня. Что­бы под­дер­жи­вать этот по­ка­за­тель в нор­ме, нуж­но при­дер­жи­вать­ся здо­ро­вой ди­е­ты с вы­со­ким со­дер­жа­ни­ем клет­чат­ки (фрук­ты и ово­щи) и ви­та­ми­нов (осо­бен­но ви­та­ми­на Е и ви­та­ми­нов груп­пы В), со­кра­тить по­треб­ле­ние жи­вот­ных жи­ров и со­всем от­ка­зать­ся от тран­с­жи­ров – то есть мар­га­ри­на и по­доб­ных про­дук­тов.

Источник: www.kp.ru

BioximiaForYou

Качественные реакции на липиды дают возможность ознакомиться с некоторыми представителями этих соединений и их свойствами.

Реакция №1 « Акролеиновая проба (обнаружение глицеринсодержащих липидов)»

Принцип: в основе реакции лежит способность глицерина при нагревании терять воду и превращаться в акролеин – ненасыщенный альдегид с резким специфическим запахом.

С помощью этой реакции обнаруживают глицерин, входящий в состав нейтральных жиров и фосфолипидов.

Реакция №2 «Обнаружение лецитина в желтке куриного яйца»

Принцип: лецитины, относящиеся к группе фосфолипидов, не растворяются в воде и ацетоне, но хорошо растворяются в спирте, эфире, хлороформе.

Реакция №3 «Обнаружение холестерина»

Холестерин относится к стеринам и по химической природе представляет собой циклический ненасыщенный вторичный спирт. Холестерин может образовывать эфиры с высшими жирными кислотами.

Принцип: В основе реакций для обнаружения холестерина лежит способность образовывать окрашенные соединения в присутствии серной кислоты и уксусного ангидрида. Этой реакцией пользуются для количественного определения холестерина в крови.

Реактивы: 1) холестерин, 1% хлороформный раствор; 2) серная кислота, концентрированная; 3) уксусный ангидрид.

1. Реакция Сальковского.

Ход определения: в сухую пробирку вносят 10 капель раствора холестерина и осторожно по стенке пробирки наслаивают 0,5 мл серной кислоты. На границе жидкостей появляется красное кольцо.

2. Реакция Либермана-Бурхардта.

Ход определения: в сухую пробирку вносят 10 капель раствора холестерина, 5 капель уксусного ангидрида и 2 капли серной кислоты. Постепенно появляется сине-зелёное окрашивание.

Реакция №4 «Эмульгирование жира»

Для того, чтобы подвергнуться расщеплению под действием ферментов в ЖКТ жиры предварительно должны эмульгироваться. Эмульсия представляет собой дисперсную систему, состоящую из множества мелких капелек нерастворимой жидкости, например – жира, равномерно распределенных в жидкой фазе. Основными эмульгаторами жира в пищеварительном тракте являются желчные кислоты, а также белки, мыла и соли угольной кислоты, содержащиеся в некотором количестве в двенадцатиперстной кишке.

Принцип: взбалтывая жир с водой, можно наблюдать образование расслаивающейся, нестойкой эмульсии. Добавляя поверхностно-активные вещества, можно получить стойкую эмульсию. Эмульгаторы легко адсорбируются на поверхности раздела двух фаз, образуя тончайшую пленку, которая препятствует слиянию капелек эмульсии.

Реактивы: 1) растительное масло; 2) дистиллированная вода; 3) мыло, 1% раствор; 4) желчь; 5) яичный белок, 1% раствор; 6) карбонат натрия (сода), 1% раствор.

Ход определения: в 5 пробирок (предварительно пронумерованных) наливают по 3 капли растительного масла. В 1-ю пробирку добавляют 20 капель дистиллированной воды; во 2-ю пробирку – 20 капель желчи; в 3-ю – 20 капель мыла; в 4-ю – 20 капель яичного белка; в 5-ю – раствор карбоната натрия. Все пробирки предварительно взбалтывают. Через 5 минут оценивают сохранение эмульсии.

Указания к составлению отчета: результаты опыта занесите в таблицу, отмечая, образование эмульсии, её сохранность и степень дисперсности.

Источник: bioximia.narod.ru

Холестерол общий

Холестерол общий (холестерин) – жироподобное вещество, необходимое организму для нормального функционирования клеток, переваривания пищи, создания многих гормонов. При избытке холестерола (холестерина) увеличивается риск появления бляшек в артериях, которые могут приводить к их закупорке и вызывать инфаркт или инсульт.

Blood cholesterol, Cholesterol, Chol, Cholesterol total.

Колориметрический фотометрический метод.

Ммоль/л (миллимоль на литр).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозую, капиллярную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

  1. Не принимать пищу в течение 12 часов перед исследованием.
  2. Исключить физическое и эмоциональное перенапряжение за 30 минут до исследования.
  3. Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Холестерол (ХС, холестерин) – жироподобное вещество, жизненно необходимое организму. Правильное научное именование этого вещества – “холестерол” (окончание “-ол” указывает на принадлежность к спиртам), однако в массовой литературе получило распространение наименование “холестерин”, которым мы будем пользоваться в дальнейшем в этой статье. Холестерин участвует в образовании клеточных мембран всех органов и тканей тела. На основе холестерина создаются гормоны, которые участвуют в росте, развитии организма и реализации функции воспроизведения. Из холестерина образуются желчные кислоты, которые входят в состав желчи, благодаря им в кишечнике всасываются жиры.

Холестерин нерастворим в воде, поэтому для перемещения по организму он “упаковывается” в белковую оболочку, состоящую из специальных белков – аполипопротеинов. Получившийся комплекс (холестерин + аполипопротеин) называется липопротеином. В крови циркулирует несколько типов липопротеинов, различающихся пропорциями входящих в их состав компонентов:

  • липопротеины очень низкой плотности (ЛПОНП),
  • липопротеины низкой плотности (ЛПНП),
  • липопротеины высокой плотности (ЛПВП).

ХС ЛПНП и ХС ЛПОНП считаются “плохими” видами холестерина, так как они способствуют образованию бляшек в артериях, ХС ЛПВП, напротив, называют “хорошим”, так как составе ЛПВП удаляются избыточные количества холестерина.

Анализ на общий холестерол (холестерин) измеряет суммарное количество холестерина (и “плохого”, и “хорошего”), циркулирующего в крови в виде липопротеинов.

В печени производится достаточное для нужд организма количество холестерина, однако часть поступает с пищей, в основном с мясом и жирными молочными продуктами. Если у человека есть наследственная предрасположенность к повышению холестерина или он употребляет слишком много холестерин-содержащей пищи, то уровень холестерина в крови может повышаться и причинять вред организму. Избыточные количества холестерина откладываются в стенках сосудов в виде бляшек, которые могут ограничивать движение крови по сосуду, а также делают сосуды более жесткими (атеросклероз), что значительно повышает риск заболеваний сердца (ишемической болезни, инфаркта) и инсульта.

Читайте также:  Диета мочевая кислота холестерин

Для чего используется исследование?

  • Чтобы оценить риск развития атеросклероза и проблем с сердцем.
  • Для профилактики многих заболеваний.

Когда назначается исследование?

  • Не реже одного раз в 5 лет всем взрослым старше 20 лет (обычно он входит в перечень стандартного набора тестов при профилактических осмотрах).
  • Вместе с анализами на ХС ЛПНП, ХС ЛПОНП, ХС ЛПВП, триглицериды и с коэффициентом атерогенности – это так называемая липидограмма.
  • Несколько раз в год, если предписана диета с ограничением животных жиров и/или принимаются лекарства, снижающие уровень холестерина (чтобы проверить, достигает ли человек целевого уровня холестерина и, соответственно, снижается ли риск сердечно-сосудистых заболеваний).
  • Если в жизни пациента присутствует один или несколько факторов риска развития сердечно-сосудистых заболеваний:
    • курение,
    • определенный возрастной период (мужчины старше 45 лет, женщины старше 55 лет),
    • повышенное артериального давление (140/90 мм. рт. ст и выше),
    • повышенный уровень холестерина или сердечно-сосудистые заболевания у других членов семьи (инфаркт или инсульт у ближайшего родственника мужского пола моложе 55 лет или женского моложе 65 лет),
    • ишемическая болезнь сердца,
    • перенесенный инфаркт сердечной мышцы или инсульт,
    • сахарный диабет,
    • избыточная масса тела,
    • злоупотребление алкоголем,
    • прием большого количества пищи, содержащей животные жиры,
    • низкая физическая активность.
  • В 2-10 лет ребенку, в семье которого у кого-то были заболевания сердца в молодом возрасте или повышенный холестерин.

Что означают результаты?

Референсные значения (норма холестерина): 2,9 – 5,2 ммоль/л.

Понятие “норма” не вполне применимо по отношению к уровню общего холестерина. Для разных людей с разным количеством факторов риска норма холестерина будет отличаться. Тест на общий холестерол (холестерин) используется для определения риска возникновения сердечно-сосудистых заболеваний, однако, чтобы определить этот риск для конкретного пациента наиболее точно, необходимо оценить все предрасполагающие факторы.

Причины повышения уровня общего холестерина (гиперхолестеринемии)

Гиперхолестеринемия может быть результатом наследственной предрасположенности (семейная гиперхолестеринемия) или избыточного приема с пищей животных жиров. У большинства людей с повышенным холестерином в той или иной мере задействованы оба фактора.

У взрослых при профилактическом обследовании результаты распределяются в три группы по степени риска возникновения сердечно-сосудистых заболеваний:

  • приемлемый уровень холестерина – ниже 5,2 ммоль/л – низкий риск;
  • пограничный уровень – 5,2-6,2 ммоль/л – средний риск (в этом случае дополнительно может быть назначено определение так называемого липидного профиля (липидограммы), чтобы определить, за счет какой фракции холестерина повышен его общий уровень – ЛПНП (“плохой”) или ЛПВП (“хорошей”);
  • высокий уровень холестерина – больше 6,2 ммоль/л – высокий риск (опять же может быть назначен липидный профиль – для уточнения причины повышения общего холестерина).

Уровень холестерина является лишь одним из факторов риска сердечно-сосудистых заболеваний. Общая оценка этого риска осуществляется с учетом всех параметров, включая наличие сердечно-сосудистых заболеваний у пациента или его родственников, курение, повышенное артериальное давление, сахарный диабет, ожирение и др. Для пациентов, у которых присутствуют подобные факторы, целевые уровни общего холестерина составляют меньше 4 ммоль/л. Для более точного определения риска возникновения сердечно-сосудистых заболеваний назначают тест на холестерин липопротеинов низкой плотности (ХС ЛПНП).

Перед назначением лечения необходимо исключить другие причины повышения общего холестерина:

  1. холестаз – застой желчи, который может быть вызван заболеванием печени (гепатит, цирроз) или камнями в желчном пузыре,
  2. хроническое воспаление почек, приводящее к нефротическому синдрому,
  3. хроническая почечная недостаточность,
  4. снижение функции щитовидной железы (гипотиреоз),
  5. плохо вылеченный сахарный диабет,
  6. алкоголизм,
  7. ожирение,
  8. рак простаты или поджелудочной железы.

Причины понижения уровня общего холестерина (гипохолестеринемии)

  • Наследственность.
  • Тяжелое заболевание печени.
  • Онкологические заболевания костного мозга.
  • Повышенная функция щитовидной железы (гипертиреоз).
  • Нарушения всасывания в кишечнике.
  • Фолиево- или B12-дефицитная анемия.
  • Распространенные ожоги.
  • Туберкулез.
  • Острые заболевания, острые инфекции.
  • Хроническая обструктивная болезнь легких.

Что может влиять на результат?

Концентрация холестерина время от времени может изменяться, это нормально. Единичное измерение не всегда отражает обычный уровень, поэтому иногда может потребоваться пересдать анализ через 1-3 месяца.

Повышают уровень общего холестерина:

  • беременность (тест на холестерин следует сдавать по меньшей мере через 6 недель после родов),
  • длительное голодание,
  • сдача крови в положении стоя,
  • анаболические стероиды, андрогены, кортикостероиды,
  • курение,
  • прием пищи, содержащей животные жиры.

Снижают уровень общего холестерина:

  • сдача крови в положении лежа,
  • аллопуринол, клофибрат, колхицин, противогрибковые препараты, статины, холестирамин, эритромицин, эстрогены,
  • интенсивная физическая нагрузка,
  • диета с высоким содержанием полиненасыщенных жирных кислот.



  • Анализ на холестерин необходимо сдавать, когда человек относительно здоров. После острого заболевания, инфаркта, хирургической операции перед измерением холестерина следует подождать как минимум 6 недель.
  • В США холестерин измеряется в миллиграммах на децилитр, в России и в Европе – в миллимолях на литр. Пересчет осуществляется по формуле: ХС (мг/дл) = ХС (ммоль/л) × 38,5 или ХС (ммоль/л) = ХС (мг/дл) х 0,0259.

Источник: helix.ru

2. Нарушения метаболизма. Биохимия специализированных тканей

Методы определения содержания холестерина сыворотки крови

Методы определения содержания холестерина сыворотки крови

фото Методы определения содержания холестерина сыворотки кровиМетоды определения общего холестерина подразделяются на:

1) колориметрические. Насчитывается около 150 колориметрических методов, основывающихся на реакциях образования цветных комплексов;

2) нефелометрические методы, основанные на сравнении степени мутности стандартного и исследуемого раствора;

3) титрометрические методы;

4) флюориметрические методы, позволяющие определять холестерин в микрообъемах сыворотки крови (например, в 0,01 мл ее);

5) газохроматографические и хроматографические методы;

6) гравиметрические методы.

Метод определения общего холестерина в сыворотке крови, основанный на реакции Либермана—Бурхарда (метод Илька)

В сильнокислой безводной среде ХС взаимодействует со смесью серной, уксусной кислот и уксусного ангидрида. В ходе реакции ХС последовательно окисляется. При этом каждая стадия реакции сопровождается образованием молекулы ХС, которая имеет на одну двойную связь больше, чем соединение, из которого она образовалась.

В результате конечного окисления иона 3,5-холестодиена получается окрашенное соединение, растворенное в серной кислоте и дающее максимум абсорбции при 410 и 610 нм. Из-за неустойчивости окраски соединения время фотометрирования должно быть точно выдержано.

Читайте также:  Как проявляется атеросклероз сосудов нижних конечностей

Реакционная смесь со стандартным раствором ХС имеет изумрудный цвет. Однако пробы сыворотки могут давать зеленый, голубой, бурый цвета. Это связано с тем, что в результате образования эндогенного тепла в реакцию вступают многие компоненты сыворотки крови. Кроме того, в реакции Либермана—Бурхарда свободный ХС и его эфиры образуют цветные комплексы с разным коэффициентом молекулярного поглощения. В случае высокого содержания эфиров ХС оптическая плотность оказывается более высокой. Поскольку на прямое определение ХС влияют многие факторы, реакцию ХС со смесью Либермана—Бурхарда нельзя считать специфичной.

Прямой метод определения ХС относительно прост в исполнении и недорог. Однако токсичность и способность вызывать коррозию системы в современных анализаторах ограничивают применение метода. В крупных лабораториях предпочтение отдают ферментативным методам определения ХС.

Референтные величины: холестерин 4,65—6,46 ммоль/л (180—250 мг/дл).

При концентрации холестерина в пробе выше 16 ммоль/л сыворотку разводят физиологическим раствором в соотношении 1 : 1 (результат).

Реакция чувствительна на изменение температуры, поэтому необходимо особенно соблюдать охлаждение реакционной смеси после добавки серной кислоты.

Билирубин в концентрации выше 50 мкмоль/л влияет на результат анализа.

Интерференцию билирубина можно исправить расчетом. Содержание 17 мкмоль/л билирубина приводит к завышению содержания холестерина в сыворотке примерно на 0,1 моль/л.

Сыворотка должна быть негемолизированной.

1. Ледяная уксусная кислота.

2. Концентрированная серная кислота.

3. Уксусный ангидрид.

4. Абсолютный этиловый спирт.

5. Кислотная смесь: в сухую колбу наливают 10 мл ледяной уксусной кислоты и 50 мл уксусного ангидрида, затем при постоянном перемешивании и охлаждении добавляют 10 мл концентрированной серной кислоты. Смесь должна быть бесцветной или слегка желтоватой. Хранить в холодильнике в темной склянке с притертой пробкой.

6. Калибровочный раствор: 232 мг холестерина растворяют в 2—3 мл хлороформа и доводят до объема 100 мл абсолютным этиловым спиртом. Приготовленный раствор содержит холестерин в концентрации 6 ммоль/л.

К 2,1 мл кислотной смеси медленно по стенке пробирки добавляют 0,1 мл плазмы или сыворотки без признаков гемолиза, перемешивают встряхиванием и ставят на 20 мин в термостат или водяную баню при температуре 37 °С, затем фотометрируют в кювете с длиной оптического пути 0,5 см против реактива при длине волны 625 нм.

Построение калибровочной кривой и расчет.

К 0,05—0,2 мл калибровочного раствора добавляют такое количество кислотной смеси, чтобы общий объем был 2,2 мл, перемешивают и выдерживают 20 мин при температуре 37 °С, так же как и опытные пробы, а затем фотометрируют. Окраска калибровочной пробы, в которую взято 0,05 мл калибровочного раствора, соответствует содержанию холестерина в плазме 3 ммоль/л, пробы, в которую взято 0,1 мл, — содержанию 6 ммоль/л и т.д.

1. Попадание воды приводит к помутнению раствора.

2. Следы гемолиза или желтушность исследуемой плазмы или сыворотки служат причиной завышенных результатов.

3. Можно использовать для фотометрии и кюветы с длиной оптического пути 1 см, тогда количество кислотной смеси удваивают, а количество исследуемого материала остается прежним.

Метод определения содержания холестерина в сыворотке крови, основанный на холестеролоксидазной реакции

Холестерин и его эфиры выделяются из липопротеинов детергентами. Холестеринэстераза гидролизует эфиры. В результате последующего ферментативного окисления холестерина холестериноксидазой образуется Н2О2.

Эфир холестерина + Н2О2 ↔ холестерин + жирные кислоты;

Холестерин + О2 ↔ холестен-3-ОН + Н2О2;

Н2О2 + n-хлорфенол + 4-аминоантипирин ↔ хинониминовый краситель + Н2О2.

Уровни нормы ХС, выявленные при обследовании “в целом здорового населения”, относительно высоки. С точки зрения риска развития ишемической болезни сердца уровни ХС желательны:

1) рекомендуемый — менее 5,18 ммоль/л;

2) умеренный риск — 5,18—6,19 ммоль/л;

3) высокий риск — более 6,22 ммоль/л.

Увеличение концентрации ХС наблюдается при полигенной гиперлипопротеидемии типа II А и II Б, III, гиперлипопротеидемии I, IV, V типов, вторичной, приобретенной гиперлипопротеидемии, отмечается также при заболеваниях печени, внутри- и внепеченочном холестазе, гломерулонефрите, нефротическом синдроме, ХПН, злокачественных опухолях поджелудочной железы, простаты, гипотиреозе, подагре, ИБС, беременности, диабете, алкоголизме, анальбуминемии, дисглобулинемии, острой перемежающейся порфирии.

Снижение концентрации холестерина обнаружено при дефиците α-липопротеида (болезнь Танжера), гипо- и а-β-липопротеидемии, некрозе печеночных клеток, злокачественных опухолях печени, гипертиреозе, нарушении всасывания, нарушении питания, мегалобластной анемии, сидеробластной анемии, талассемии, острых тяжелых заболеваниях, обширных ожогах, хронических обструктивных заболеваниях легких, умственной отсталости, ревматоидном артрите, лимфангиоэктазии кишечника.

Отмечены сезонные колебания уровня ХС, более высокие осенью и зимой, более низкие весной и летом. Повторное определение ХС после инфаркта миокарда необходимо проводить через три месяца.

Метод определения содержания липопротеинов высокой плотности в сыворотке крови

Липопротеины очень низкой плотности (ЛПОНП) и низкой плотности (ЛПНП) в противоположность липопротеинам высокой плотности (ЛПВП) образуют нерастворимые комплексы с гепарином в присутствии ионов марганца. В надосадочной жидкости, оставшейся после осаждения ЛПНП и ЛПОНП, остается α-холестерин или ЛПВП.

Нормальное содержание ХС ЛПВП в сыворотке крови составляет 0,9—1,9 ммоль/л.

Хиломикроны, ЛПОНП (липопротеины очень низкой плотности) и ЛПНП (липопротеины низкой плотности) осаждаются добавлением фосфорно-вольфрамовой кислоты и хлорида магния.

После центрифугирования супернатант содержит ЛПВП (липопротеины высокой плотности) — фракцию, содержание холестерина в которой определяется ферментативно.

Полученные значения достоверны, если:

1) в пробе нет хиломикронов;

2) концентрация триацилглицеридов не превышает 400 мг/100 мл;

3) в пробах не обнаруживается следов III типа дислипопротеинемии.

При измерении на Hg 546 нм происходит завышение количества ЛПВП холестерина спектром поглощения гемоглобина, которое можно игнорировать при значениях до 200 мг Нb/100 мл.

Полученный при центрифугировании супернатант должен быть прозрачен. Если проба содержит большое количество триглицеридов (более 1000 мг/100 мл), осаждение липопротеинов может быть неполным (мутный супернатант) или часть осадка может плавать на поверхности. В этих случаях развести образец 1 : 1 0,9%-ным раствором NaCl и повторить осаждение.

Клинико-диагностическое значение ХС-ЛПВП

Эпидемиологические исследования показали обратную зависимость между уровнями ХС-ЛПВП и распространенностью ИБС. Определение ХС-ЛПВП способствует выявлению риска развития ИБС.

Повышению уровня ХС-ЛПВП способствуют такие заболевания, как первичный билиарный цирроз, хронический гепатит, алкоголизм, прочие хронические интоксикации.

Источник: edu.volgmed.ru