Метод определения холестерина к сыворотке

Методы определения общего холестерина в крови

Холестерин это один из жиров, соединение вырабатывается печенью и имеет очень важное значение для правильного функционирования всех органов и организма в целом.

Каждая клетка нашего тела содержит в наружной мембране часть холестерина.

У животных это соединение представлено как воскообразный стероид, который транспортируется кровью. Холестерин относится к спиртам. По химической номенклатуре называется холестерол. Использовать можно оба эти названия.

Это вещество выполняет ряд функций:

  • покрывает нервные волокна;
  • участвует в процессе метаболизма жирорастворимых витаминов;
  • принимает участие в выработке витамина Д в кожном покрове под воздействием солнечного света;
  • активный компонент в процессе синтеза половых гормонов;
  • участвует в производстве кортизола, альдостерона.

Для человеческого организма, нормальный уровень выработки холестерина имеет показатель от 3,5 ммоль на литр до 7,7 ммоль на литр. Хотя, если прислушиваться к рекомендациям специалистов из Великобритании, то показатель выше 6 моль на литр считается уже завышенным. При таком показателе увеличивается риск возникновения атеросклеротической патологии. Практически все врачи классифицируют показатели — миллиграмм/децилитр или миллимоль/литр, поэтому общепринятые значения могут отличаться:

  1. в норме содержание меньше 200 мг/дл;
  2. выше нормы — до 239 мг/дл;
  3. высокий показатель — 240 мг/дл;
  4. подходящий уровень — от 5 до 6,3 ммоль/л;
  5. незначительно завышен — от 6,4 ммоль/л;
  6. допустимый, но высокий — от 6,5 до 7,7 ммоль/л;
  7. завышенный уровень — выше 7,9 ммоль/л.

Рекомендованный уровень холестерина в сыворотке крови человека, должен составлять плотность 5 ммоль на литр.

Методы определения содержания холестерина

Современная медицина на сегодняшний день разработала много методов определения холестерина в крови.

Для одной из диагностических проверок, достаточно всего лишь обратиться ближайшую больницу.

Если присутствует в организме высокий уровень, это может привести к плохим последствиям.

В таком случае заниматься самолечением категорически запрещено.

Методики и принцип определения:

  • Гравиметрический;
  • Титриметрический;
  • Флуориметреческий метод способен измерять холестерин при малейшем объеме сыворотки крови;
  • Газохроматографический и хроматографический;
  • Колориметрический метод;
  • Тонкослойная хроматография;
  • Газожидкостная хроматография;
  • Полярографический метод способен точно определить общий холестерин в сыворотке крови, а также свободный;
  • Ферментативный метод. Протекает по определенному алгоритму.
  • Спектрофотометрический — зависит от содержания холестерола.

Существует также поляриметрический метод. Этот метод основан на проведении нескольких цветных реакций.

Первая реакция это Биоля-Крофта. Для неё используются уксусную кислоту и серную, при наличии холестерина раствор приобретает красный цвет.

Вторая реакция — это Ригли. Реакция заключается во взаимодействии холестерина с раствором, содержащим метанол и серную кислоту.

Третья реакция – Чугаева, основана на взаимодействии холестерина с ацетилхлоридом и хлористым цинком.

При наличии холестерина раствор приобретает красную окраску. Следующая реакция Либермана-Бурхарда. В ходе реакции происходит окисление холестерина в кислой среде, не содержащей воды.

В результате образуются сопряженные двойные связи. В результате появляется комплексное соединение изумрудно-зеленого цвета. Эта реакция отличается от остальных тем, что не имеет постоянного окрашивания. В медлитературе встречается разное соотношение компонентов реакции.

Последний Метод это реакция Калиани-Златкмса-Зака.

Результат реакции должен проявиться в виде красно-фиолетового окраса раствора. Весь процесс происходит в результате окисления холестерина под влиянием серной и уксусной кислот.

Заболевания при высоком уровне холестерина в крови

Высокий уровень холестерина может привести к различным заболеваниям.

Врачи рекомендуют сдавать общий анализ крови на концентрацию холестерина каждый год.

Такой подход позволяет выявить большое количество патологий на ранних стадиях развития.

При наличии отклонений от нормы в содержании ЛПВП и ЛПНП в организме возможно возникновение ряда заболеваний, таких как:

  1. стенокардия;
  2. инсульт;
  3. инфаркт миокарда;
  4. расстройства в работе сосудистой системы;
  5. атеросклероз и другие патологии.

Стенокардия — это болезнь, которая характеризуется острой болью, дискомфортными ощущениями в грудной клетке. Данные симптомы спровоцированы тем сердечная мышца не получает необходимое количество кислорода и питательных веществ для нормальной работы.

Микроинсульт, инсульт. Возникает вследствие образования в крови сгустка, способного блокировать кровеносный сосуд, расположенный в головном мозге.

В результате происходит нарушение кровообращения, приводящее к постепенному отмиранию клеток определенного участка головного мозга.

Инфаркт миокарда это патология, формирующаяся при блокировке доступа крови к клеткам сердечной мышцы, в результате чего возникает кислородное голодание. Чаще всего это спровоцировано образованием тромба, расположенного в просвете коронарных артерий. Это может привести к частичной гибели сердечной мышцы.

Атеросклероз. Данная патология бывает нескольких типов.

Выделяют атеросклероз нижних конечностей, сосудов сердца, печени, почек, желудка и других органов. Возникает в результате образования атеросклеротических бляшек, которые расположены в сосудах кровеносной системы. Они затрудняют или полностью перекрывают кровоток, что приводит к нарушению кровообращения. Прогрессирование заболевания может спровоцировать наступление летального исхода.

Поэтому при выявлении нарушений на ранних стадиях нужно обратиться к специалистам, чтобы не допустить образование бляшек.

Причины и симптомы повышенного холестерина

Существует множеств разных симптомов, по которым можно самостоятельно выявить наличие повышенного холестерина в крови.

Опытный специалист определяет это без исследования. Легче всего определить наличие повышенного уровня по присутствию в организме характерных нарушений в работе.

Для повышенного холестерина характерно наличие у больного следующих симптомов:

  • Появление желтых пятен на кожных покровах, особенно вокруг глаз. Данный симптом имеет медицинское название — ксантома. Чаще всего это может передаваться наследственным путем.
  • Появление болевых ощущений возникающих в конечностях при оказании на организм физической нагрузки. Симптом развивается в результате сужения артериальных сосудов снабжающих кровью конечности.
  • Наличие стенокардии, возникающей в результате сужения коронарных артерии сердца.
  • Образование мини инсульта, в результате формирования сгустков крови и разрыва сосуда.
  • Развитие сердечной недостаточности, в результате недостатка в кислороде и питательных веществ.

Все причины, по которым может быть повышен холестерин в крови, разделяют на два вида изменяемые и неизменяемые.

Основным фактором, оказывающим влияние на повышение уровня холестерина в крови, является неправильное питание и неправильный образ жизни. Помимо этого на этот показатель может оказывать влияние состояние окружающей среды.

Читайте также:  Можно есть мороженое при повышенном холестерине

К неизменяемым факторам относятся возраст и генетическая предрасположенность в возникновении повышенной концентрации холестерина.

Основными причинами повышения холестерина являются:

  1. Вредные привычки. Курение является одной из основных причин возникновения патологии. Потребление алкогольных напитков может привести к алкогольной зависимости, как правило, все алкоголики имеют высокий уровень ЛПНП, а уровень ЛПВП — понижен.
  2. Лишний вес. Группа людей, которые страдают от лишних килограммов или ожирения обладают высоким уровнем ЛПНП. Это наблюдается чаще, чем у людей с нормальным весом.
  3. Неподвижный образ жизни. Для сохранения нормального уровня холестерина, нужно ежедневно делать утреннюю зарядку на протяжении 20 минут. По возможности рекомендуется ходить в спортзал на занятия с тренером, заниматься аквааэробикой, ездить на велосипеде минимум раз в неделю. У кого нет такой возможности, могут заниматься быстрой ходьбой ежедневно на протяжении 1 часа. Не рекомендуется вести малоподвижный образ жизни.

Помимо этого к основным причинам относится неправильное питание. Некоторые продукты содержат повышенное количество холестерина. Например, яйца, почки. Чтобы избежать повышенного показателя, следует придерживаться правильного питания. Рекомендуется рассчитывать количество калорий на каждый день с учетом энергетической и пищевой ценности продуктов.

Факты о холестерине рассмотрены в видео в этой статье.

Источник: diabetik.guru

2. Нарушения метаболизма. Биохимия специализированных тканей

Методы определения содержания холестерина сыворотки крови

Методы определения содержания холестерина сыворотки крови

фото Методы определения содержания холестерина сыворотки кровиМетоды определения общего холестерина подразделяются на:

1) колориметрические. Насчитывается около 150 колориметрических методов, основывающихся на реакциях образования цветных комплексов;

2) нефелометрические методы, основанные на сравнении степени мутности стандартного и исследуемого раствора;

3) титрометрические методы;

4) флюориметрические методы, позволяющие определять холестерин в микрообъемах сыворотки крови (например, в 0,01 мл ее);

5) газохроматографические и хроматографические методы;

6) гравиметрические методы.

Метод определения общего холестерина в сыворотке крови, основанный на реакции Либермана—Бурхарда (метод Илька)

В сильнокислой безводной среде ХС взаимодействует со смесью серной, уксусной кислот и уксусного ангидрида. В ходе реакции ХС последовательно окисляется. При этом каждая стадия реакции сопровождается образованием молекулы ХС, которая имеет на одну двойную связь больше, чем соединение, из которого она образовалась.

В результате конечного окисления иона 3,5-холестодиена получается окрашенное соединение, растворенное в серной кислоте и дающее максимум абсорбции при 410 и 610 нм. Из-за неустойчивости окраски соединения время фотометрирования должно быть точно выдержано.

Реакционная смесь со стандартным раствором ХС имеет изумрудный цвет. Однако пробы сыворотки могут давать зеленый, голубой, бурый цвета. Это связано с тем, что в результате образования эндогенного тепла в реакцию вступают многие компоненты сыворотки крови. Кроме того, в реакции Либермана—Бурхарда свободный ХС и его эфиры образуют цветные комплексы с разным коэффициентом молекулярного поглощения. В случае высокого содержания эфиров ХС оптическая плотность оказывается более высокой. Поскольку на прямое определение ХС влияют многие факторы, реакцию ХС со смесью Либермана—Бурхарда нельзя считать специфичной.

Прямой метод определения ХС относительно прост в исполнении и недорог. Однако токсичность и способность вызывать коррозию системы в современных анализаторах ограничивают применение метода. В крупных лабораториях предпочтение отдают ферментативным методам определения ХС.

Референтные величины: холестерин 4,65—6,46 ммоль/л (180—250 мг/дл).

При концентрации холестерина в пробе выше 16 ммоль/л сыворотку разводят физиологическим раствором в соотношении 1 : 1 (результат).

Реакция чувствительна на изменение температуры, поэтому необходимо особенно соблюдать охлаждение реакционной смеси после добавки серной кислоты.

Билирубин в концентрации выше 50 мкмоль/л влияет на результат анализа.

Интерференцию билирубина можно исправить расчетом. Содержание 17 мкмоль/л билирубина приводит к завышению содержания холестерина в сыворотке примерно на 0,1 моль/л.

Сыворотка должна быть негемолизированной.

1. Ледяная уксусная кислота.

2. Концентрированная серная кислота.

3. Уксусный ангидрид.

4. Абсолютный этиловый спирт.

5. Кислотная смесь: в сухую колбу наливают 10 мл ледяной уксусной кислоты и 50 мл уксусного ангидрида, затем при постоянном перемешивании и охлаждении добавляют 10 мл концентрированной серной кислоты. Смесь должна быть бесцветной или слегка желтоватой. Хранить в холодильнике в темной склянке с притертой пробкой.

6. Калибровочный раствор: 232 мг холестерина растворяют в 2—3 мл хлороформа и доводят до объема 100 мл абсолютным этиловым спиртом. Приготовленный раствор содержит холестерин в концентрации 6 ммоль/л.

К 2,1 мл кислотной смеси медленно по стенке пробирки добавляют 0,1 мл плазмы или сыворотки без признаков гемолиза, перемешивают встряхиванием и ставят на 20 мин в термостат или водяную баню при температуре 37 °С, затем фотометрируют в кювете с длиной оптического пути 0,5 см против реактива при длине волны 625 нм.

Построение калибровочной кривой и расчет.

К 0,05—0,2 мл калибровочного раствора добавляют такое количество кислотной смеси, чтобы общий объем был 2,2 мл, перемешивают и выдерживают 20 мин при температуре 37 °С, так же как и опытные пробы, а затем фотометрируют. Окраска калибровочной пробы, в которую взято 0,05 мл калибровочного раствора, соответствует содержанию холестерина в плазме 3 ммоль/л, пробы, в которую взято 0,1 мл, — содержанию 6 ммоль/л и т.д.

1. Попадание воды приводит к помутнению раствора.

2. Следы гемолиза или желтушность исследуемой плазмы или сыворотки служат причиной завышенных результатов.

3. Можно использовать для фотометрии и кюветы с длиной оптического пути 1 см, тогда количество кислотной смеси удваивают, а количество исследуемого материала остается прежним.

Метод определения содержания холестерина в сыворотке крови, основанный на холестеролоксидазной реакции

Холестерин и его эфиры выделяются из липопротеинов детергентами. Холестеринэстераза гидролизует эфиры. В результате последующего ферментативного окисления холестерина холестериноксидазой образуется Н2О2.

Эфир холестерина + Н2О2 ↔ холестерин + жирные кислоты;

Холестерин + О2 ↔ холестен-3-ОН + Н2О2;

Н2О2 + n-хлорфенол + 4-аминоантипирин ↔ хинониминовый краситель + Н2О2.

Уровни нормы ХС, выявленные при обследовании “в целом здорового населения”, относительно высоки. С точки зрения риска развития ишемической болезни сердца уровни ХС желательны:

Читайте также:  Есть ли в вареном мясе холестерин

1) рекомендуемый — менее 5,18 ммоль/л;

2) умеренный риск — 5,18—6,19 ммоль/л;

3) высокий риск — более 6,22 ммоль/л.

Увеличение концентрации ХС наблюдается при полигенной гиперлипопротеидемии типа II А и II Б, III, гиперлипопротеидемии I, IV, V типов, вторичной, приобретенной гиперлипопротеидемии, отмечается также при заболеваниях печени, внутри- и внепеченочном холестазе, гломерулонефрите, нефротическом синдроме, ХПН, злокачественных опухолях поджелудочной железы, простаты, гипотиреозе, подагре, ИБС, беременности, диабете, алкоголизме, анальбуминемии, дисглобулинемии, острой перемежающейся порфирии.

Снижение концентрации холестерина обнаружено при дефиците α-липопротеида (болезнь Танжера), гипо- и а-β-липопротеидемии, некрозе печеночных клеток, злокачественных опухолях печени, гипертиреозе, нарушении всасывания, нарушении питания, мегалобластной анемии, сидеробластной анемии, талассемии, острых тяжелых заболеваниях, обширных ожогах, хронических обструктивных заболеваниях легких, умственной отсталости, ревматоидном артрите, лимфангиоэктазии кишечника.

Отмечены сезонные колебания уровня ХС, более высокие осенью и зимой, более низкие весной и летом. Повторное определение ХС после инфаркта миокарда необходимо проводить через три месяца.

Метод определения содержания липопротеинов высокой плотности в сыворотке крови

Липопротеины очень низкой плотности (ЛПОНП) и низкой плотности (ЛПНП) в противоположность липопротеинам высокой плотности (ЛПВП) образуют нерастворимые комплексы с гепарином в присутствии ионов марганца. В надосадочной жидкости, оставшейся после осаждения ЛПНП и ЛПОНП, остается α-холестерин или ЛПВП.

Нормальное содержание ХС ЛПВП в сыворотке крови составляет 0,9—1,9 ммоль/л.

Хиломикроны, ЛПОНП (липопротеины очень низкой плотности) и ЛПНП (липопротеины низкой плотности) осаждаются добавлением фосфорно-вольфрамовой кислоты и хлорида магния.

После центрифугирования супернатант содержит ЛПВП (липопротеины высокой плотности) — фракцию, содержание холестерина в которой определяется ферментативно.

Полученные значения достоверны, если:

1) в пробе нет хиломикронов;

2) концентрация триацилглицеридов не превышает 400 мг/100 мл;

3) в пробах не обнаруживается следов III типа дислипопротеинемии.

При измерении на Hg 546 нм происходит завышение количества ЛПВП холестерина спектром поглощения гемоглобина, которое можно игнорировать при значениях до 200 мг Нb/100 мл.

Полученный при центрифугировании супернатант должен быть прозрачен. Если проба содержит большое количество триглицеридов (более 1000 мг/100 мл), осаждение липопротеинов может быть неполным (мутный супернатант) или часть осадка может плавать на поверхности. В этих случаях развести образец 1 : 1 0,9%-ным раствором NaCl и повторить осаждение.

Клинико-диагностическое значение ХС-ЛПВП

Эпидемиологические исследования показали обратную зависимость между уровнями ХС-ЛПВП и распространенностью ИБС. Определение ХС-ЛПВП способствует выявлению риска развития ИБС.

Повышению уровня ХС-ЛПВП способствуют такие заболевания, как первичный билиарный цирроз, хронический гепатит, алкоголизм, прочие хронические интоксикации.

Источник: edu.volgmed.ru

Что такое сывороточный холестерин?

Сейчас как никогда часто говорят о вреде холестерола, что привело к необычайной популярности антихолестериновых диет. Но действительно ли это разумное решение и что же все-таки такое сывороточный холестерин? Когда пациент сдает кровь на развернутый биохимический анализ, то получает от лаборантов определение количества холестерина в сыворотке крови. Но в действительности это не одна субстанция, а группка нескольких. И бороться нужно далеко не всеми элементами.

Что это такое?

Определение: холестерол производится клетками печени, он необходим для осуществления разнообразных обменных процессов. А вот с продуктами питания, которые вкусны, но считаются вредными, в организм поступает лишь его небольшая часть. 80% от общего уровня холестерина вырабатывается клетками печени людей. И только около 20% поступает вместе с пищей. При этом холестерин имеет возможность находиться в тканях тела или в плазме крови. Последний и называют сывороточным. Как осуществляется определение количества холестерина в сыворотке крови, его необходимость и прочее мы рассмотрим в этой статье.

Необходимость в холестероле

Этот элемент в теле реализовывает целый ряд значительных функций, поэтому его уменьшение не менее плохо, чем увеличение. Вот зачем оно необходимо человеку:

  • вырабатывание клеточных мембран;
  • формирование витамина Д;
  • синтезирование желчи;
  • создание некоторых видов гормонов.

Благодаря холестерину клеточные мембраны становятся прочнее и не такими уязвимыми к гемолитическим ядам.

Благодаря холестерину клеточные мембраны делаются крепче и не такими уязвимыми к гемолитическим ядам. Желчь необходима для нормального пищеварения. Кроме того, холестерин принимает участие в выработке кортизола, эстрогена и андрогена. Это вещество относится к нерастворимым в воде жирам, в кровяном русле оно переносится с помощью особого вида белков. Определение его количества осуществляется при содействии рассмотрения крови.

Сывороточный холестерол и его фракции

Соединения сывороточного холестерина с белками-транспортировщиками называют липопротеидами. Масса молекул у этих белков различная, исходя из этого, выделяют такие виды липопротеидов:

  • с высокой плотностью;
  • с низкой плотностью;
  • с очень низкой плотностью.

Белковые соединения высокой и низкой плотности переносят холестерин к сосудам и в ткани. Липопротеиды очень низкой плотности помимо этого транспортируют еще и триглицериды. Липопротеиды низкой плотности являются нестабильным соединением, они могут оседать на стенках сосудов и образовывать так называемые холестериновые бляшки. Это и есть тот самый плохой холестерин.

Хороший холестерин – это соединения высокой плотности, которые переносят плохой в клетки печени.

Там он перерабатывается в желчь и выводится из тела. Также липопротеиды этого вида способны растворять атеросклеротические бляшки. Вот почему эти показатели и их определение так немаловажны.

Сколько должно быть холестерола?

Кровь исследуют на наличие сывороточного холестерола, чтобы получить представление о качестве жировой мены в теле. Благодаря этому анализу можно установить вероятность развития тех или иных патологий. Уровень этого вещества определяется многими факторами, при этом важно определить не только общий сывороточный ХС, но и его отдельные фракции.

Измеряется это вещество в моль/литр или в мг/дц. Для взрослого человека нормой считается уровень от 200 до 240 мг/дц. Для ребенка – от 170 до 200 мг/дц. При этом уровень ЛНВП в идеале должен составлять не более 100 мг/дц. Придерживаться антихолестериновой диеты следует, если показатели превышают 150 мг/дц. Существуют специальные таблицы для разных полов и возрастов, с их помощью удобно определять, повышен или понижен плохой сывороточный холестерин, и на каком уровне находится хороший.

Читайте также:  Семя льна снижение холестерина

Что влияет на содержание сывороточного холестерола?

Существует три группки факторов, в зависимости от которых может изменяться уровень липопротеидов в крови:

Факторы физиологического характера

К ним относится возраст человека, его половая принадлежность, а у женщин также беременность. Чем старше человек, тем выше у него будет сывороточный ХС. Обусловлено это частично накоплением жиров, поступающих вместе с продуктами питания, а частично воздействием половых гормонов. Например, андрогены способны повышать количество сывороточного холестерола, а эстрогены – уменьшать его. Поэтому у мужчин сывороточный ХС немного возвышеннее, чем у представительниц слабого пола. Но с годами разница в количествах сглаживается.

Аномальные факторы

Вредные привычки могут очень сильно повлиять на степень сывороточного ХС в теле. Употребление никотина и спиртное значительно повышают его содержание. Также могут повлиять дисфункции желчного пузыря или недомогания органов эндокринной системы. Не исключается наследственная предрасположенность к повышенному образованию сывороточного ХС в организме – такая патология называется гиперлипидемия. Неправильное питание, ведущее к ожирению, также влияет на уровень этого вещества.

Не менее негативные последствия имеют голодание и постоянные диеты – такие нарушения питания ведут к развитию серьезных патологий со стороны нервной или эндокринной систем.

Пищевой фактор

Считается одним из важнейших в регулировке обмена жиров в организме. При этом нужно понимать, что одно лишь питание не является решающим. Если человек злоупотребляет жирной, тяжелой пищей, то это приводит не только к лишнему зачислению в организм плохого ХС, страдают также печень и желчный пузырь. А, следовательно, не могут нейтрализовать и выводить липопротеиды сниженной частоты.

Для профилактики формирования холестериновых бляшек и развития атеросклероза следует стараться включать в рацион те продовольствия, какие не включают холестерол или содействуют его расщеплению и выходу из организма.

Благодаря исследованию крови на сывороточный ХС можно не только своевременно диагностировать различные патологии, но и установить риск их развития. Всем людям старше 30 лет рекомендуется раз в год сдавать кровь на сывороточный ХС, чтобы контролировать его уровень. Если врач посчитает нужным, он посоветует лечебную диету, а при значительных повышениях холестерина назначит лекарственные препараты.

Источник: sosudportal.ru

Фармацевтика и Клиническая Диагностика

Производим наборы реагентов Глюкоза ФКД и Холестерин ФКД

+7 (499) 347-7836

Москва , ул. Малая Юшуньская , д . 1 , к . 1

Инструкция на Холестерин ФКД

по применению набора реагентов для определения концентрации общего холестерина колориметрическим энзиматическим методом

Набор предназначен для количественного определения общего холестерина в плазме и сыворотке крови человека энзиматическим колориметрическим методом в клинико-диагностических и биохимических лабораториях и научно-исследовательской практике.

Набор рассчитан на проведение 200 определений при расходе 1,0 мл рабочего реагента на 1 анализ и пригоден для различных вариантов микроанализа.

При гидролизе эфиров холестерина холестеринэстеразой образуется свободный холестерин. Образовавшийся и свободный холестерин окисляется кислородом воздуха под действием холестериноксидазы с образованием эквимолярного количество перекиси водорода: последний под действием пероксидазы окисляет хромогенные субстраты с образованием окрашенного соединения. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации холестерина в анализируемом образце и измеряется фотометрически при длине волны 500 (490–540) нм.

Ферментно-хромогенная смесь: (…………………….) – 10 таблеток.

Детергент: 10% р-р тритон Х-100, 1 мл – 1 флакон.

Калибратор: калибровочный раствор холестерина, 5,17 ммоль/л (200 мг/дл), 1 мл – 1 флакон.

АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА

Набор обеспечивает линейность при определении холестерина в диапазоне концентраций от 2,0 до 25,0 ммоль/л, отклонение от линейности – не более 5%. Чувствительность – не более 0,5 ммоль/л. Коэффициент вариации – не более 5%.

Стабильность окраски не менее 1 часа.

Для проверки правильности определений рекомендуется использовать отечественные или зарубежные контрольные сыворотки, аттестованные данным методом.

Нормальные величины содержания холестерина в сыворотке и плазме крови человека – 3,5–6,9 ммоль/л,

Рекомендуется в каждой лаборатории уточнить диапазон значений нормальных величин для обследуемого контингента людей.

Ферментно-хромогенная смесь содержит токсичные компоненты. В случае попадания ее раствора на кожу и(или) слизистые необходимо сразу же промыть пораженное место большим количеством воды. Пипетирование per os категорически запрещается. Другие компоненты набора в используемых концентрациях являются нетоксичными.

При работе с сывороткой или плазмой крови необходимо соблюдать правила техники безопасности принятые в лаборатории, т.к. образцы человеческой крови следует рассматривать как потенциально инфицированые.

Проводить в соответствии с местными правилами.

Негемолизированная сыворотка крови. Гепаринизированная или ЭДТА плазма.

Сыворотку и плазму крови получают обычным образом. Стабильность образцов

1 день при 20-25 °С

3 месяца при -20 °С

ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАГЕНТЫ

– Спектрофотометр, длина волны 500нм, или фотоэлектроколориметр, (490–540) нм, кювета с длиной оптического пути 10 или 5 мм;

– пипетки полуавтоматические одноканальные со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объемы жидкости 0,025–2,0 мл;

– флаконы или пробирки вместимостью 5-10 мл;

– колбы мерные вместимостью 100 или 200 мл;

– пробирки стеклянные вместимостью 10 мл;

– термостат, поддерживающий температуру +37±1° С;

ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ АНАЛИЗА

Приготовление рабочего реагента: 10 таблеток ферментно-хромогенной смеси поместить в мерную колбу вместимостью 200 мл. Добавить 150 мл дистиллированной воды и 0,4 мл раствора детергента. Тщательно перемешать до полного растворения таблеток, избегая вспенивания раствора. Довести объем дистиллированной водой до метки. Допускается наличие мелких нерастворенных частиц. В случае их появления, раствору дать отстояться и его аккуратно перелить в чистую емкость. Перенести рабочий реагент в посуду из темного стекла.

Полученный рабочий реагент можно хранить в темном месте в плотно укупоренной посуде при температуре (+2–8° С) не более 7 дней.

Внести в пробирки анализируемые образцы сыворотки или плазмы крови и реагенты по следующей схеме:

Источник: www.fkd.ru