Холестерин принцип определение

2. Нарушения метаболизма. Биохимия специализированных тканей

Методы определения содержания холестерина сыворотки крови

Методы определения содержания холестерина сыворотки крови

фото Методы определения содержания холестерина сыворотки кровиМетоды определения общего холестерина подразделяются на:

1) колориметрические. Насчитывается около 150 колориметрических методов, основывающихся на реакциях образования цветных комплексов;

2) нефелометрические методы, основанные на сравнении степени мутности стандартного и исследуемого раствора;

3) титрометрические методы;

4) флюориметрические методы, позволяющие определять холестерин в микрообъемах сыворотки крови (например, в 0,01 мл ее);

5) газохроматографические и хроматографические методы;

6) гравиметрические методы.

Метод определения общего холестерина в сыворотке крови, основанный на реакции Либермана—Бурхарда (метод Илька)

В сильнокислой безводной среде ХС взаимодействует со смесью серной, уксусной кислот и уксусного ангидрида. В ходе реакции ХС последовательно окисляется. При этом каждая стадия реакции сопровождается образованием молекулы ХС, которая имеет на одну двойную связь больше, чем соединение, из которого она образовалась.

В результате конечного окисления иона 3,5-холестодиена получается окрашенное соединение, растворенное в серной кислоте и дающее максимум абсорбции при 410 и 610 нм. Из-за неустойчивости окраски соединения время фотометрирования должно быть точно выдержано.

Реакционная смесь со стандартным раствором ХС имеет изумрудный цвет. Однако пробы сыворотки могут давать зеленый, голубой, бурый цвета. Это связано с тем, что в результате образования эндогенного тепла в реакцию вступают многие компоненты сыворотки крови. Кроме того, в реакции Либермана—Бурхарда свободный ХС и его эфиры образуют цветные комплексы с разным коэффициентом молекулярного поглощения. В случае высокого содержания эфиров ХС оптическая плотность оказывается более высокой. Поскольку на прямое определение ХС влияют многие факторы, реакцию ХС со смесью Либермана—Бурхарда нельзя считать специфичной.

Прямой метод определения ХС относительно прост в исполнении и недорог. Однако токсичность и способность вызывать коррозию системы в современных анализаторах ограничивают применение метода. В крупных лабораториях предпочтение отдают ферментативным методам определения ХС.

Референтные величины: холестерин 4,65—6,46 ммоль/л (180—250 мг/дл).

При концентрации холестерина в пробе выше 16 ммоль/л сыворотку разводят физиологическим раствором в соотношении 1 : 1 (результат).

Реакция чувствительна на изменение температуры, поэтому необходимо особенно соблюдать охлаждение реакционной смеси после добавки серной кислоты.

Билирубин в концентрации выше 50 мкмоль/л влияет на результат анализа.

Интерференцию билирубина можно исправить расчетом. Содержание 17 мкмоль/л билирубина приводит к завышению содержания холестерина в сыворотке примерно на 0,1 моль/л.

Сыворотка должна быть негемолизированной.

1. Ледяная уксусная кислота.

2. Концентрированная серная кислота.

3. Уксусный ангидрид.

4. Абсолютный этиловый спирт.

5. Кислотная смесь: в сухую колбу наливают 10 мл ледяной уксусной кислоты и 50 мл уксусного ангидрида, затем при постоянном перемешивании и охлаждении добавляют 10 мл концентрированной серной кислоты. Смесь должна быть бесцветной или слегка желтоватой. Хранить в холодильнике в темной склянке с притертой пробкой.

6. Калибровочный раствор: 232 мг холестерина растворяют в 2—3 мл хлороформа и доводят до объема 100 мл абсолютным этиловым спиртом. Приготовленный раствор содержит холестерин в концентрации 6 ммоль/л.

К 2,1 мл кислотной смеси медленно по стенке пробирки добавляют 0,1 мл плазмы или сыворотки без признаков гемолиза, перемешивают встряхиванием и ставят на 20 мин в термостат или водяную баню при температуре 37 °С, затем фотометрируют в кювете с длиной оптического пути 0,5 см против реактива при длине волны 625 нм.

Построение калибровочной кривой и расчет.

К 0,05—0,2 мл калибровочного раствора добавляют такое количество кислотной смеси, чтобы общий объем был 2,2 мл, перемешивают и выдерживают 20 мин при температуре 37 °С, так же как и опытные пробы, а затем фотометрируют. Окраска калибровочной пробы, в которую взято 0,05 мл калибровочного раствора, соответствует содержанию холестерина в плазме 3 ммоль/л, пробы, в которую взято 0,1 мл, — содержанию 6 ммоль/л и т.д.

1. Попадание воды приводит к помутнению раствора.

2. Следы гемолиза или желтушность исследуемой плазмы или сыворотки служат причиной завышенных результатов.

3. Можно использовать для фотометрии и кюветы с длиной оптического пути 1 см, тогда количество кислотной смеси удваивают, а количество исследуемого материала остается прежним.

Метод определения содержания холестерина в сыворотке крови, основанный на холестеролоксидазной реакции

Холестерин и его эфиры выделяются из липопротеинов детергентами. Холестеринэстераза гидролизует эфиры. В результате последующего ферментативного окисления холестерина холестериноксидазой образуется Н2О2.

Эфир холестерина + Н2О2 ↔ холестерин + жирные кислоты;

Холестерин + О2 ↔ холестен-3-ОН + Н2О2;

Н2О2 + n-хлорфенол + 4-аминоантипирин ↔ хинониминовый краситель + Н2О2.

Уровни нормы ХС, выявленные при обследовании “в целом здорового населения”, относительно высоки. С точки зрения риска развития ишемической болезни сердца уровни ХС желательны:

1) рекомендуемый — менее 5,18 ммоль/л;

2) умеренный риск — 5,18—6,19 ммоль/л;

3) высокий риск — более 6,22 ммоль/л.

Увеличение концентрации ХС наблюдается при полигенной гиперлипопротеидемии типа II А и II Б, III, гиперлипопротеидемии I, IV, V типов, вторичной, приобретенной гиперлипопротеидемии, отмечается также при заболеваниях печени, внутри- и внепеченочном холестазе, гломерулонефрите, нефротическом синдроме, ХПН, злокачественных опухолях поджелудочной железы, простаты, гипотиреозе, подагре, ИБС, беременности, диабете, алкоголизме, анальбуминемии, дисглобулинемии, острой перемежающейся порфирии.

Снижение концентрации холестерина обнаружено при дефиците α-липопротеида (болезнь Танжера), гипо- и а-β-липопротеидемии, некрозе печеночных клеток, злокачественных опухолях печени, гипертиреозе, нарушении всасывания, нарушении питания, мегалобластной анемии, сидеробластной анемии, талассемии, острых тяжелых заболеваниях, обширных ожогах, хронических обструктивных заболеваниях легких, умственной отсталости, ревматоидном артрите, лимфангиоэктазии кишечника.

Отмечены сезонные колебания уровня ХС, более высокие осенью и зимой, более низкие весной и летом. Повторное определение ХС после инфаркта миокарда необходимо проводить через три месяца.

Метод определения содержания липопротеинов высокой плотности в сыворотке крови

Липопротеины очень низкой плотности (ЛПОНП) и низкой плотности (ЛПНП) в противоположность липопротеинам высокой плотности (ЛПВП) образуют нерастворимые комплексы с гепарином в присутствии ионов марганца. В надосадочной жидкости, оставшейся после осаждения ЛПНП и ЛПОНП, остается α-холестерин или ЛПВП.

Нормальное содержание ХС ЛПВП в сыворотке крови составляет 0,9—1,9 ммоль/л.

Хиломикроны, ЛПОНП (липопротеины очень низкой плотности) и ЛПНП (липопротеины низкой плотности) осаждаются добавлением фосфорно-вольфрамовой кислоты и хлорида магния.

После центрифугирования супернатант содержит ЛПВП (липопротеины высокой плотности) — фракцию, содержание холестерина в которой определяется ферментативно.

Полученные значения достоверны, если:

1) в пробе нет хиломикронов;

2) концентрация триацилглицеридов не превышает 400 мг/100 мл;

Читайте также:  Диета при атеросклерозе аорты коронарных артерий

3) в пробах не обнаруживается следов III типа дислипопротеинемии.

При измерении на Hg 546 нм происходит завышение количества ЛПВП холестерина спектром поглощения гемоглобина, которое можно игнорировать при значениях до 200 мг Нb/100 мл.

Полученный при центрифугировании супернатант должен быть прозрачен. Если проба содержит большое количество триглицеридов (более 1000 мг/100 мл), осаждение липопротеинов может быть неполным (мутный супернатант) или часть осадка может плавать на поверхности. В этих случаях развести образец 1 : 1 0,9%-ным раствором NaCl и повторить осаждение.

Клинико-диагностическое значение ХС-ЛПВП

Эпидемиологические исследования показали обратную зависимость между уровнями ХС-ЛПВП и распространенностью ИБС. Определение ХС-ЛПВП способствует выявлению риска развития ИБС.

Повышению уровня ХС-ЛПВП способствуют такие заболевания, как первичный билиарный цирроз, хронический гепатит, алкоголизм, прочие хронические интоксикации.

Источник: edu.volgmed.ru

Методы определения общего холестерина в крови

Холестерин это один из жиров, соединение вырабатывается печенью и имеет очень важное значение для правильного функционирования всех органов и организма в целом.

Каждая клетка нашего тела содержит в наружной мембране часть холестерина.

У животных это соединение представлено как воскообразный стероид, который транспортируется кровью. Холестерин относится к спиртам. По химической номенклатуре называется холестерол. Использовать можно оба эти названия.

Это вещество выполняет ряд функций:

  • покрывает нервные волокна;
  • участвует в процессе метаболизма жирорастворимых витаминов;
  • принимает участие в выработке витамина Д в кожном покрове под воздействием солнечного света;
  • активный компонент в процессе синтеза половых гормонов;
  • участвует в производстве кортизола, альдостерона.

Для человеческого организма, нормальный уровень выработки холестерина имеет показатель от 3,5 ммоль на литр до 7,7 ммоль на литр. Хотя, если прислушиваться к рекомендациям специалистов из Великобритании, то показатель выше 6 моль на литр считается уже завышенным. При таком показателе увеличивается риск возникновения атеросклеротической патологии. Практически все врачи классифицируют показатели — миллиграмм/децилитр или миллимоль/литр, поэтому общепринятые значения могут отличаться:

  1. в норме содержание меньше 200 мг/дл;
  2. выше нормы — до 239 мг/дл;
  3. высокий показатель — 240 мг/дл;
  4. подходящий уровень — от 5 до 6,3 ммоль/л;
  5. незначительно завышен — от 6,4 ммоль/л;
  6. допустимый, но высокий — от 6,5 до 7,7 ммоль/л;
  7. завышенный уровень — выше 7,9 ммоль/л.

Рекомендованный уровень холестерина в сыворотке крови человека, должен составлять плотность 5 ммоль на литр.

Методы определения содержания холестерина

Современная медицина на сегодняшний день разработала много методов определения холестерина в крови.

Для одной из диагностических проверок, достаточно всего лишь обратиться ближайшую больницу.

Если присутствует в организме высокий уровень, это может привести к плохим последствиям.

В таком случае заниматься самолечением категорически запрещено.

Методики и принцип определения:

  • Гравиметрический;
  • Титриметрический;
  • Флуориметреческий метод способен измерять холестерин при малейшем объеме сыворотки крови;
  • Газохроматографический и хроматографический;
  • Колориметрический метод;
  • Тонкослойная хроматография;
  • Газожидкостная хроматография;
  • Полярографический метод способен точно определить общий холестерин в сыворотке крови, а также свободный;
  • Ферментативный метод. Протекает по определенному алгоритму.
  • Спектрофотометрический — зависит от содержания холестерола.

Существует также поляриметрический метод. Этот метод основан на проведении нескольких цветных реакций.

Первая реакция это Биоля-Крофта. Для неё используются уксусную кислоту и серную, при наличии холестерина раствор приобретает красный цвет.

Вторая реакция — это Ригли. Реакция заключается во взаимодействии холестерина с раствором, содержащим метанол и серную кислоту.

Третья реакция – Чугаева, основана на взаимодействии холестерина с ацетилхлоридом и хлористым цинком.

При наличии холестерина раствор приобретает красную окраску. Следующая реакция Либермана-Бурхарда. В ходе реакции происходит окисление холестерина в кислой среде, не содержащей воды.

В результате образуются сопряженные двойные связи. В результате появляется комплексное соединение изумрудно-зеленого цвета. Эта реакция отличается от остальных тем, что не имеет постоянного окрашивания. В медлитературе встречается разное соотношение компонентов реакции.

Последний Метод это реакция Калиани-Златкмса-Зака.

Результат реакции должен проявиться в виде красно-фиолетового окраса раствора. Весь процесс происходит в результате окисления холестерина под влиянием серной и уксусной кислот.

Заболевания при высоком уровне холестерина в крови

Высокий уровень холестерина может привести к различным заболеваниям.

Врачи рекомендуют сдавать общий анализ крови на концентрацию холестерина каждый год.

Такой подход позволяет выявить большое количество патологий на ранних стадиях развития.

При наличии отклонений от нормы в содержании ЛПВП и ЛПНП в организме возможно возникновение ряда заболеваний, таких как:

  1. стенокардия;
  2. инсульт;
  3. инфаркт миокарда;
  4. расстройства в работе сосудистой системы;
  5. атеросклероз и другие патологии.

Стенокардия — это болезнь, которая характеризуется острой болью, дискомфортными ощущениями в грудной клетке. Данные симптомы спровоцированы тем сердечная мышца не получает необходимое количество кислорода и питательных веществ для нормальной работы.

Микроинсульт, инсульт. Возникает вследствие образования в крови сгустка, способного блокировать кровеносный сосуд, расположенный в головном мозге.

В результате происходит нарушение кровообращения, приводящее к постепенному отмиранию клеток определенного участка головного мозга.

Инфаркт миокарда это патология, формирующаяся при блокировке доступа крови к клеткам сердечной мышцы, в результате чего возникает кислородное голодание. Чаще всего это спровоцировано образованием тромба, расположенного в просвете коронарных артерий. Это может привести к частичной гибели сердечной мышцы.

Атеросклероз. Данная патология бывает нескольких типов.

Выделяют атеросклероз нижних конечностей, сосудов сердца, печени, почек, желудка и других органов. Возникает в результате образования атеросклеротических бляшек, которые расположены в сосудах кровеносной системы. Они затрудняют или полностью перекрывают кровоток, что приводит к нарушению кровообращения. Прогрессирование заболевания может спровоцировать наступление летального исхода.

Поэтому при выявлении нарушений на ранних стадиях нужно обратиться к специалистам, чтобы не допустить образование бляшек.

Причины и симптомы повышенного холестерина

Существует множеств разных симптомов, по которым можно самостоятельно выявить наличие повышенного холестерина в крови.

Опытный специалист определяет это без исследования. Легче всего определить наличие повышенного уровня по присутствию в организме характерных нарушений в работе.

Для повышенного холестерина характерно наличие у больного следующих симптомов:

  • Появление желтых пятен на кожных покровах, особенно вокруг глаз. Данный симптом имеет медицинское название — ксантома. Чаще всего это может передаваться наследственным путем.
  • Появление болевых ощущений возникающих в конечностях при оказании на организм физической нагрузки. Симптом развивается в результате сужения артериальных сосудов снабжающих кровью конечности.
  • Наличие стенокардии, возникающей в результате сужения коронарных артерии сердца.
  • Образование мини инсульта, в результате формирования сгустков крови и разрыва сосуда.
  • Развитие сердечной недостаточности, в результате недостатка в кислороде и питательных веществ.
Читайте также:  Занятия спортом с повышенным холестерином

Все причины, по которым может быть повышен холестерин в крови, разделяют на два вида изменяемые и неизменяемые.

Основным фактором, оказывающим влияние на повышение уровня холестерина в крови, является неправильное питание и неправильный образ жизни. Помимо этого на этот показатель может оказывать влияние состояние окружающей среды.

К неизменяемым факторам относятся возраст и генетическая предрасположенность в возникновении повышенной концентрации холестерина.

Основными причинами повышения холестерина являются:

  1. Вредные привычки. Курение является одной из основных причин возникновения патологии. Потребление алкогольных напитков может привести к алкогольной зависимости, как правило, все алкоголики имеют высокий уровень ЛПНП, а уровень ЛПВП — понижен.
  2. Лишний вес. Группа людей, которые страдают от лишних килограммов или ожирения обладают высоким уровнем ЛПНП. Это наблюдается чаще, чем у людей с нормальным весом.
  3. Неподвижный образ жизни. Для сохранения нормального уровня холестерина, нужно ежедневно делать утреннюю зарядку на протяжении 20 минут. По возможности рекомендуется ходить в спортзал на занятия с тренером, заниматься аквааэробикой, ездить на велосипеде минимум раз в неделю. У кого нет такой возможности, могут заниматься быстрой ходьбой ежедневно на протяжении 1 часа. Не рекомендуется вести малоподвижный образ жизни.

Помимо этого к основным причинам относится неправильное питание. Некоторые продукты содержат повышенное количество холестерина. Например, яйца, почки. Чтобы избежать повышенного показателя, следует придерживаться правильного питания. Рекомендуется рассчитывать количество калорий на каждый день с учетом энергетической и пищевой ценности продуктов.

Факты о холестерине рассмотрены в видео в этой статье.

Источник: diabetik.guru

Общий холестерин

В состав холестерина входит две фракции — липопртотеиды низкой плотности и высокой. Такое деление обусловлено различными функциями и воздействиями на организм. А также их называют «плохим» и «хорошим», что соответствует влиянию этих веществ. Рекомендуется после 40 лет обследоваться на уровень холестерина в крови ежегодно с профилактической целью, поскольку именно эта возрастная категория страдает атеросклерозом.

Что такое общий холестерин?

Это вещество складывается из ЛПНП и ЛПВП. Его 80% синтезируется самим организмом в печени, почках, органами желудочно-кишечного тракта, 20% входит в состав употребляемой пищи. Деление на фракции необходимо для выявления скрытого атеросклероз, когда общий холестерин в норме, но плохой преувеличивает здоровые показатели. Таким образом можно рассчитать вероятность развития нарушений.

В обычном биохимическом анализе венозной крови результат выглядит как сумма ЛПНП и ЛПВП, поэтому для уточнения информации считается липидный спектр.

Плохой и хороший холестерин

Вредный холестерол связывается с липидами низкой плотности и транспортируется по всему организму. Эти составляющие неплотно контактируют между собой, что приводит к прикреплению частиц холестерина к внутренней стенке сосудов. В результате многократного наслоения возникают атеросклеротические бляшки, нарушающие нормальное кровоснабжение в пораженном органе.

Полезная фракция содержится с ЛПВП и отвечает за такие функции:

Нормальное проведение нервных импульсов невозможно без полезных липидов.

  • формирование клеточной стенки;
  • участие в синтезе гормонов;
  • укрепление миелиновых оболочек головного и спинного мозга;
  • проведение нервных импульсов;
  • формирование желчи;
  • нормализация моторики пищеварительного тракта.

Вернуться к оглавлению

Какая норма в анализах?

Здоровый человек имеет такой целевой уровень холестерина, представленный в таблице:

Пол Общий холестерин (ммоль/л) ЛПНП ЛПВП
Женский 3,61—5,25 3—4 0,91—1,91
Мужской 3,61—5,25 2,24—4,81 0,71—1,71

Формула расчета холестерина состоит из следующих математических шагов:

  1. От показателя общего холестерола нужно отнять липиды высокой плотности.
  2. Полученный результат необходимо разделить на уровень ЛПНП.

Это число показывает соотношение разных фракций между собой, в анализе его обозначают, как индекс атерогенности. Нормальный показатель находится в границах 2—2,8. Нижний уровень может составлять 1,5, верхний — 3,5. Чаще значения меняются у людей старше 40 лет без признаков атеросклероза. Психосоматика, составляющая важное звено в развитии заболеваний, может привести к возникновению симптомов болезни без изменения уровня липопротеидов.

Кому нужен контроль?

Содержание холестерина нужно определять с профилактической целью после 40 лет, при злоупотреблении курением и алкоголем, а также при таких патологических состояниях, как:

  • Ожирение.
  • Артериальная гипертензия.
  • Наличие признаков атеросклероза:
    • головная боль;
    • головокружение;
    • нарушение зрения;
    • боль в груди;
    • повышение артериального давления;
    • перебои в работе сердца;
    • приступы стенокардии;
    • одышка;
    • отечность нижних конечностей.
  • Гиподинамия.
  • Сахарный диабет.

В журнале «Клиническая эндокринология» опубликованы результаты исследования по поводу определения концентрации общего холестерина в крови у людей старше 50 лет. Высокий показатель выявлен у 75% исследуемых.

Причины отклонений

Повышенный общий прямой холестерол возникает вследствие таких факторов:

  • нерациональное питание;
  • семейная гиперхолестеринемия;
  • генерализованный атеросклероз;
  • эндокринные патологии;
  • заболевания почек;
  • органические нарушения работы печени.

Вернуться к оглавлению

Осложнения

Высокий общий холестерол является причиной следующих нарушений:

  • инфаркт миокарда;
  • стенокардия;
  • гипертоническая болезнь;
  • сердечная недостаточность;
  • ИБС — ишемическая болезнь сердца;
  • инсульт;
  • нарушение зрения;
  • ТЭЛА;
  • инфаркт легкого;
  • острая недостаточность сосудов нижних конечностей.

Пока заболевание на начальной стадии, оно не угрожает жизни человека.

Расчет холестерина имеет значение для диагностики этих осложнений, чтобы влиять на этиологический фактор их развития. Повышенный уровень липида не опасен в ранний период формирования атеросклеротических бляшек, поскольку нет нарушений состояния, а ишемия органов незначительная. В процессе прогрессирования холестериновых наслоений главная опасность — отрыв бляшки от стенки сосуда и перенос с кровью в другие органы. В них происходит полное закрытие просвета капилляров бляшкой, а значит — остановка кровоснабжения этого участка, что проявляется инфарктом, недостаточностью или острой ишемией.

Какое лечение?

Консервативные методы

Медикаментозная терапия подразумевает назначение следующих групп препаратов:

  • Статины — «Розувастатин», «Симвастатин», «Ловастатин» — блокаторы главного фермента синтеза холестерина — ГМГ-КоА-редуктазы. Механизм действия основан на торможении выработки новой порции липидов, что ведет к нормализации их уровня и соотношения в крови.
  • Фибраты — «Фенофибрат», «Гемфиброзил», «Безафибрат». Препараты способствуют снижению концентрации жирных кислот, из которых продуцируются липопротеиды. Таким образом, вещества низкой плотности не синтезируются и концентрация плохой фракции нормализуется.
  • Секвестранты желчных кислот — «Колестипол», «Колестирамин». Выводят избыток липидов через органы желудочно-кишечной системы, ускоряют пассаж желчи и моторику пищеварительного тракта.
  • Препараты никотиновой кислоты — «Ниацин», «Ниаспан». Они увеличивают концентрацию липидов повышенной плотности, ускоряют утилизацию жирных кислот и холестериновый обмен в печени.

Для нормализации показателей крови врачи одновременно назначают препараты 2—3 групп для разнонаправленного влияния на обмен веществ.

Народные методы

Для приготовления настоек из лечебных трав необходимо воспользоваться такими рецептами:

  • Средство из плодов земляники, листьев зверобоя, мать-и-мачехи и укропа. Ингредиенты соединяются в одинаковой пропорции. Заливаются водой и кипятятся на протяжении 20 минут. Отвар настаивается 2 дня, после чего его можно употреблять. Выпивают по 50 мл 3 раза в сутки перед приемом пищи.
  • Антисклеротическое средство из фиалки, руты, крушины и омелы. Все компоненты смешать и готовить, как чай. При отсутствии одного из растений, можно использовать каждое в отдельности.
  • Действенное лекарство из чеснока и лимона. Цитрусовый фрукт и головку чеснока нужно залить 0,5 л воды комнатной температуры, ранее прокипяченной. Поставить смесь в темное место на 3 дня. Принимать нужно по 2 столовые ложки 2 раза в сутки.

Вернуться к оглавлению

Особенности питания

Специалист уточняют, что без правильной диеты консервативные методы не будут эффективны длительный период. Пациент должен исключить из рациона вредные продукты, содержащие значительное количество холестерина — жирные сорта мяса, жареную, соленую, копченую еду. Нельзя употреблять легкоусвояемые углеводы, алкоголь. Основу питания должны составлять кисломолочные продукты, злаковые, свежие овощи и фрукты, зелень, орехи, миндаль. Частота приема пищи должна быть 5—6 раз в день небольшими порциями. Количество воды — не менее 2 литров в сутки.

Источник: etoholesterin.ru

Определение общего холестерина по методу Илька.

Принцип метода:

Холестерин в присутствии смеси уксусной и серной кислот, а также уксусного ангидрида дает зеленое окрашивание.

Ферментативный метод определения холестерина.

Принцип метода:

Принцип основан на действии фермента холестериноксидазы, в результате чего образуется холестенол и Н2О2.

Эфиры холестерина + Н2О холестерин + RCOOH

Холестерин + О2 ∆ 4 холестенон + Н2О2

2 Н2О2 + 4-аминофеназон + фенол 4(п-бензохинономоноимино)- феназон + 2 Н2О

Интенсивность окраски пропорциональна концентрации общего холестерина в сыворотке крови.

Материал для исследования:

1. Сыворотка крови;

2. Плазма (антикоагулянт – ЭДТА).

Реактивы:

1. Реагент № 1 буфер;

2. Реагент № 2 лиофилизат;

3. Реагент № 3 стандартный раствор холестерина.

Приготовление рабочего реагента:

Растворить содержимое одного флакона № 2 в 50 мл реагента № 1.

Ход определения:

Реактивы (мл) Холостая проба Проба Стандартная проба
Рабочий реагент 2,00 мл 2,00 мл 2,00 мл
Бидистиллированная вода 0,02 мл
Стандарт 0,02 мл
Сыворотка крови 0,02 мл

Смешать инкубировать 10 мин. при температуре 37ºС. Считывать значение абсорбции пробы (Dо) и стандартной пробы (Dст) против холостой пробы при длине волны 500 нм.

Расчет результатов:

Dо
С = ————— * концентрацию стандарта
Dст

Клинико-диагностическое значение:

Содержание ХС в значительной степени зависит от пола, возраста, состава пищи (меньше у вегетарианцев).

Повышение содержания ХС может быть физиологическим при эмоциональном возбуждении, беременности и патологическим:

1. первичным – семейная гиперхолестеринемия

2. вторичным при:

· болезнях печени: желтухи при застое желчи, гепатите, билиарном циррозе;

· болезнях почек: нефротическом синдроме, ХПН;

· болезнях поджелудочной железы: хроническом панкреатите, злокачественных опухолях;

· гипофункции щитовидной железы;

Снижение концентрации ХС наблюдается при:

· болезнях печени: циррозе в поздней стадии заболевания, острой инфекции печени; инфекциях, связанных с повреждением печени (при синдроме печеночной недостаточности);

· гиперфункции щитовидной железы;

· злоупотреблении алкоголем и т.д.

Исследование содержания ХС целесообразно у пациентов с ранними факторами риска атеросклероза, с заболеваниями сосудов и сердца, ксантомами, гипертонией, ожирением; людей, злоупотребляющих курением; а также при лечении бета-блокаторами, мочегонными и кортикостероидами.

Если в лаборатории исследуют эфирсвязанный ХС, то соотношение эХС/общий ХС = 0,6-0,7. Уменьшение количества эХС происходит параллельно степени нарушения функции печени и резкое снижение эХС является плохим прогностическим признаком, свидетельствующим о глубоком поражении печени.

ХОЛЕСТЕРИН — ЛПВП

ХС-ЛПВП – холестерин липопротеидов высокой плотности или α-холестерин. Его содержание коррелирует с уровнем неатерогенных липопротеидов крови. В организме осуществляет защитную, антиатерогенную функцию и является «тонким» критерием, отражающим состояние липидного обмена.

Особенностью функционирования ЛПВП является то, что они осуществляют транспорт ХС от клеток сосудистой стенки, периферических органов в печень, где ХС превращается в желчные кислоты и выводится из организма. Снижениеконцентрации ХС-ЛПВПниже 0,9 ммоль/л связывается с повышенным риском атеросклероза. Повышенный уровень ХС-ЛПВП рассматривается как антиатерогенный фактор.

Методы определения ХС-ЛПВП.

Метод с осаждением.

Принцип метода:

Липопротеины сыворотки человеческой крови низкой и очень плотности (ЛПНП, ЛПОНП) осаждаются под влиянием фосфовольфрамовой кислоты в присутствии ионов магния после центрифугирования. Фракции ЛПВП остаются в растворе. Холестерин, содержащийся в этих фракциях, определяют ферментативным методом.

ЛПВП-иммуно.

Это прямой иммунологический метод определения ХС-ЛПВП без центрифугирования. Антитела против человеческих липопротеинов используются для того, чтобы связать ЛПНП, ЛПОНП и хиломикроны в комплексы антиген-антитело, в то время как ХС-ЛПВП определяется ферментативным измерением холестерина.

Принцип определения:

ЛПВП, ЛПНП, ЛПОНП, ХМ ЛПВП + комплексы

человеческим β-ЛП антиген-антитело

ХС-ЛПВП + Н2О + О2 холестенон + жирная кислота + Н2О2

Н2О2 + F-DAOS + 4-аминопирин комплекс синего цвета + Н2О

Норма: 0,9-1,9 ммоль/л (не менее 25% от общего холестерина)

Повышение концентрации:

· большая и регулярная физическая активность;

· некоторые лекарства, понижающие липиды;

Снижение концентрации наблюдается при:

Снижение уровня ХС-ЛПВП сопровождает факторы риска ИБС, к числу которых относят малоподвижный образ жизни, курение, ожирение, гипертензию.

ФОСФОЛИПИДЫ

В норме около 1/3 общих липидов плазмы приходится на долю ФЛ. ФЛ плазмы включены в липопротеиды, за исключением лизолецитина, который транспортируется альбумином. Более 90% плазменных ФЛ печеночного происхождения, они поступают в циркулирующую кровь в составе ЛП. ФЛ входят в состав хиломикронов, которые формируются в энтероцитах из липидов, реабсорбированных в тонкой кишке. Молекулы ФЛ имеют гидрофильные и гидрофобные участки, тем самым оказывают стабилизирующий эффект по поддержанию ХС в растворенном состоянии. При уменьшении молекулярного соотношения ФЛ/ХС менее 3/2 рекомендуются липотропные диеты. Богатые ФЛ.

Нормальное содержание ФЛ – 1,5-3,6 г/л.

Повышение содержания наблюдается при:

· алкогольном и билиарном циррозе печени;

· вирусном гепатите (легкого течения)

Снижение содержания ФЛ в плазме крови отмечается при:

· тяжелом поражении паренхимы печени;

Опора деревянной одностоечной и способы укрепление угловых опор: Опоры ВЛ — конструкции, предназначен­ные для поддерживания проводов на необходимой высоте над землей, водой.

Механическое удерживание земляных масс: Механическое удерживание земляных масс на склоне обеспечивают контрфорсными сооружениями различных конструкций.

Организация стока поверхностных вод: Наибольшее количество влаги на земном шаре испаряется с поверхности морей и океанов (88‰).

Источник: cyberpedia.su