Определение содержания холестерина в плазме

Фармацевтика и Клиническая Диагностика

Производим наборы реагентов Глюкоза ФКД и Холестерин ФКД

+7 (499) 347-7836

Москва , ул. Малая Юшуньская , д . 1 , к . 1

Инструкция на Холестерин ФКД

по применению набора реагентов для определения концентрации общего холестерина колориметрическим энзиматическим методом

Набор предназначен для количественного определения общего холестерина в плазме и сыворотке крови человека энзиматическим колориметрическим методом в клинико-диагностических и биохимических лабораториях и научно-исследовательской практике.

Набор рассчитан на проведение 200 определений при расходе 1,0 мл рабочего реагента на 1 анализ и пригоден для различных вариантов микроанализа.

При гидролизе эфиров холестерина холестеринэстеразой образуется свободный холестерин. Образовавшийся и свободный холестерин окисляется кислородом воздуха под действием холестериноксидазы с образованием эквимолярного количество перекиси водорода: последний под действием пероксидазы окисляет хромогенные субстраты с образованием окрашенного соединения. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации холестерина в анализируемом образце и измеряется фотометрически при длине волны 500 (490–540) нм.

Ферментно-хромогенная смесь: (…………………….) – 10 таблеток.

Детергент: 10% р-р тритон Х-100, 1 мл – 1 флакон.

Калибратор: калибровочный раствор холестерина, 5,17 ммоль/л (200 мг/дл), 1 мл – 1 флакон.

АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА

Набор обеспечивает линейность при определении холестерина в диапазоне концентраций от 2,0 до 25,0 ммоль/л, отклонение от линейности – не более 5%. Чувствительность – не более 0,5 ммоль/л. Коэффициент вариации – не более 5%.

Стабильность окраски не менее 1 часа.

Для проверки правильности определений рекомендуется использовать отечественные или зарубежные контрольные сыворотки, аттестованные данным методом.

Нормальные величины содержания холестерина в сыворотке и плазме крови человека – 3,5–6,9 ммоль/л,

Рекомендуется в каждой лаборатории уточнить диапазон значений нормальных величин для обследуемого контингента людей.

Ферментно-хромогенная смесь содержит токсичные компоненты. В случае попадания ее раствора на кожу и(или) слизистые необходимо сразу же промыть пораженное место большим количеством воды. Пипетирование per os категорически запрещается. Другие компоненты набора в используемых концентрациях являются нетоксичными.

При работе с сывороткой или плазмой крови необходимо соблюдать правила техники безопасности принятые в лаборатории, т.к. образцы человеческой крови следует рассматривать как потенциально инфицированые.

Проводить в соответствии с местными правилами.

Негемолизированная сыворотка крови. Гепаринизированная или ЭДТА плазма.

Сыворотку и плазму крови получают обычным образом. Стабильность образцов

1 день при 20-25 °С

3 месяца при -20 °С

ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАГЕНТЫ

– Спектрофотометр, длина волны 500нм, или фотоэлектроколориметр, (490–540) нм, кювета с длиной оптического пути 10 или 5 мм;

– пипетки полуавтоматические одноканальные со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объемы жидкости 0,025–2,0 мл;

– флаконы или пробирки вместимостью 5-10 мл;

– колбы мерные вместимостью 100 или 200 мл;

– пробирки стеклянные вместимостью 10 мл;

– термостат, поддерживающий температуру +37±1° С;

ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ АНАЛИЗА

Приготовление рабочего реагента: 10 таблеток ферментно-хромогенной смеси поместить в мерную колбу вместимостью 200 мл. Добавить 150 мл дистиллированной воды и 0,4 мл раствора детергента. Тщательно перемешать до полного растворения таблеток, избегая вспенивания раствора. Довести объем дистиллированной водой до метки. Допускается наличие мелких нерастворенных частиц. В случае их появления, раствору дать отстояться и его аккуратно перелить в чистую емкость. Перенести рабочий реагент в посуду из темного стекла.

Полученный рабочий реагент можно хранить в темном месте в плотно укупоренной посуде при температуре (+2–8° С) не более 7 дней.

Внести в пробирки анализируемые образцы сыворотки или плазмы крови и реагенты по следующей схеме:

Источник: www.fkd.ru

Определение содержания холестерина в плазме

Принцип метода.Определение основано на ферментативном (с участием холестеролэстеразы — ХЭ) гидролизе эфиросвязанной фракции холестерина и окислении всего содержащегося в исследуемой биологической жидкости свободного холестерина под влиянием холестеролоксидазы (ХО). Реакция сопровождается высвобождением пероксида водорода, вызывающего катализируемое пероксидазой (ПО) превращение 4-аминоантипирина (4-ААП) и фенола в окрашенное соединение (хинонимин) розово-малиного цвета с максимумом поглощения при 500 нм. Интенсивность окраски образовавшегося продукта пропорциональна концентрации холестерина.

Эфиры холестерина + Н2О → холестерин + жирные кислоты,

Ход работы.Приготовить опытные пробы (0,02 мл сыворотки крови и 2 мл рабочего реагента), холостую пробу (0,02 мл дистиллированной воды и 2 мл рабочего реагента) и пробу с калибратором (0,02 мл калибратора и 2 мл рабочего реагента). Рабочий реагент обязательно вносить в пробирки после проб, содержащих холестерин. Пробирки встряхнуть и инкубировать при температуре 37°С. Через 10 минут после начала инкубации пробирки повторно встряхнуть и инкубировать еще 20 минут при температуре 37°С. Окрашенные пробы фотометрировать при 500 нм в кювете с длиной оптического пути 5 мм относительно холостой пробы. Окраска стабильна в течении двух часов при комнатной температуре. Концентрацию холестерина в исследуемых пробах рассчитать по формуле:

Читайте также:  Для чего статины

где: Еоп и Ек – оптическая плотность исследуемой пробы и пробы с калибратором, соответственно. При результате выше 13 ммоль/л пробы следует развести в два раза дистиллированной водой, повторить анализ и полученный результат умножить на 2.

Ход работы.Приготовить пробы:

Компоненты реакционной смеси Опытная проба, мл Калибровочная проба Холостая проба, мл
Сыворотка крови 0,02
Дистиллированная вода 0,02
Калибратор 0,02
Рабочий реагент 2,00 2,00 2,00

Реакционные смеси перемешать и инкубировать в течение 20 минут при температуре 37°С. Измерить оптическую плотность опытной и калибровочной проб против холостой пробы при длине волны 500 нм в кюветах с шириной слоя 5 мм. Окраска раствора стабильна в течение 2 часов при предохранении от прямого солнечного света.

Расчет.Содержание холестерина в сыворотке крови (С) в ммоль/л определяют по формуле:

где: Еоп и Ек – оптическая плотность исследуемой пробы и пробы с калибратором, соответственно;

5,17 – концентрация холестерина в калибраторе, ммоль/л.

При результате выше 13 ммоль/л пробы следует развести в два раза дистиллированной водой, повторить анализ и полученный результат умножить на 2.

Интерпретация результатов анализа:

Уровень холестерина в крови (показатели концентрации холестерина в сыворотке крови):

нормальный (желаемый) — 6,2 или 6,7 ммоль/л соответственно для мужчин и женщин старше 20 лет;

умеренная гиперхолестеринемия – 6,2-7,5 или 6,5-7,8 ммоль/л;

тяжелая гиперхолестеринемия — > 7,5 или > 7,8 ммоль/л.

Источник: studopedia.ru

Норма холестерина по возрасту и полу [наглядная таблица]

Бытует мнение, что холестерин – это вредное соединение, которое может расшатать здоровье сердечно-сосудистой системы, вплоть до самых тяжелых осложнений – атеросклероза, инфарктов и инсультов. Действительно, при нарушенном липидном обмене, когда показатели холестерина значительно превышают нормальные, такие последствия возможны. Зная об этом, каждый человек задается вопросом, высокий уровень – это сколько?

Подробно рассмотрим, какая норма холестерина в крови по возрасту и полу считается безопасной. Приведем официальные таблицы значений от сертифицированных лабораторий.

Почему нужно следить за уровнем холестерина

В норме, холестерол – это не просто составная часть метаболизма, а жизненно необходимое вещество. По своей структуре, он является сложным жироподобным спиртом. Порядка 20% общего количества холестерина – экзогенного происхождения, то есть поступающего в организм с пищей. Остальной, эндогенный, синтезируется внутренними органами, в первую очередь – печенью и кишечником.

Холестерин принимает участие почти во всех процессах биосинтеза стероидных и половых гормонов, поскольку является для них субстратом. Кроме того, он является строительным материалом для клеточных стенок и мембран, участвует в трансформации витамина Д.

Сам по себе, холестерин – неподвижное соединение, поэтому для того, чтобы транспортироваться в органы и клетки-мишени, он связывается с «белками-переносчиками». Полученный молекулярный конгломерат называется липопротеидом. Они бывают трех видов – ЛПВП, ЛПНП и ЛПОНП (высокой, низкой и очень низкой плотности соответственно). У здорового взрослого человека должны быть все эти фракции, но в пределах конкретных норм и определенной пропорцией между друг другом.

Липопротеиды низкой плотности, условно принято именовать «плохим» холестеролом, а ЛПВП – «хорошим». Связано это с особенностью их свойств. Жиры низкой плотности легче, мельче и обладают способностью прилипать друг к другу и к стенкам артерий. Таким образом, когда возрастает их содержание в крови, они начинают оседать между волокнами эндотелия, вызываю в нем воспалительные процессы. Впоследствии, в таких очагах формируются атеросклеротические бляшки. Свою роль ЛПНП играют и в процессе тромбообразования, ведь они склеиваются не только друг с другом, но и с другими крупными клетками крови.

Читайте также:  Как по другому называется холестерин

Этот механизм лежит в основе такого заболевания, как атеросклероз сосудов. Процесс повышения концентрации вредного холестерина не отображается внешне, то есть на первых этапах болезнь протекает без симптомов или каких-либо клинических признаков. На начальной стадии, распознать нарушение липидного баланса можно только в биохимическом анализе крови из вены.

Чем раньше будет диагностировано изменение нормальных значений холестерина, тем легче и быстрее получится вылечиться. Зачастую если сдвиги липидограммы выявлены вовремя и еще не проявили себя жалобами, то проблему можно решить простой корректировкой питания. В противном случае, если ситуация запущенная и выявлена очень поздно, то прогноз на выздоровление не такой радужный – назначается медикаментозная терапия, а в некоторых случаях и хирургическое лечение.

Сводная таблица норм холестерина в крови у женщин и мужчин

Какие показания холестерина считаются нормой у здорового человека? Конкретной универсальной цифры не существует. На нее влияет множество факторов, основные из которых пол и возраст. Именно опираясь на эти два параметра, докторами составлена таблица по возрасту с показателями уровня общего холестерина в норме.

Приведенные цифры нормального уровня липидных соединений являются очень усредненными и могут отличаться индивидуально у каждого человека. Связано это с тем, что на норму холестерина влияют такие факторы, как характер питания, образ жизни, уровень физической активности, наличие вредных привычек, генетически детерминированные состояния и т. д.

Особенно опасным, в плане риска атеросклероза, является возраст после 35–40 лет. В этот период происходят гормональные перестройки организма и первые ощутимые изменения в липидограмме. К примеру, в 35 лет 6,58 единиц — это верхняя граница нормы, а в 40 лет, допустимым уровнем для мужчин общего холестерина уже считается до 6,99 ммоль/л.

Чем старше человек становится, тем больше у него появляется сопутствующих заболеваний и тем ниже становится реактивность организма. Все это добавляет дополнительный риск осложнений при липидных нарушениях. Сахарный диабет, стенокардия, ИБС – у пожилых людей эти диагнозы встречаются довольно часто. Для них границы нормы холестерина должны быть ниже, так как компенсаторные функции сосудистой системы снижены. Таким образом, целевой уровень при ИБС, инсультов или инфарктов в анамнезе, составляет на 2,5 ммоль/л ниже верхней границы нормы для каждого возраста соответственно.

В 50 лет отмечаются заметные изменения нормы холестерина у женщин. Связанно это со снижением синтеза гормонов, изменением их фона и снижением потребности в холестерине эндокринной системы. У мужчин после 55, а чаще – после 60 лет, показатели нормы становятся стабильными и имеют тенденцию с возрастом плавно снижаться.

При лабораторной расшифровке у взрослых, необходимо обращать внимание не только на нормы общего холестерола. Не менее важным являются значения триглицеридов, плохого и хорошего холестерина (ЛПНП и ЛПВП соответственно), коэффициента атерогенности.

Какой самый высокий холестерин может быть у человека

Согласно исследованиям, высокий холестерол – это индивидуальное понятие, поэтому нельзя сказать, какие его цифры считаются максимальными или минимальными. Показатели холестерина от 5,2 до 6,19 ммоль/л принято считать повышенными умеренно. При таких цифрах нужно обратить внимание на другие пункты липидограммы, в особенности на ЛПНП. Если количество общего холестерина, согласно анализу, выше 6,2 ммлоль/л, то такое состояние считается опасным для здоровья с высоким риском развития атеросклероза.

Нормы холестерола и коэффициент атерогенности

Холестерин в крови содержится в норме только в связанном виде в разных его фракциях. Эти соединения не только должны быть в определенных диапазонах нормы, но и быть в правильном соотношении между собой. Например, такой параметр в анализе, как коэффициент атерогенности, указывает на соотношении хорошего, полезного холестерола ЛПВП к показателю общего холестерина.

Коэффициент атерогенности может наиболее точно отобразить, в каком состоянии находится жировой обмен. На него обращают внимание как на индикатор гиполипидемической терапии. Для его расчета необходимо от значений общего холестерина, отнять значение полезного холестерола и полученную разницу разделить на ЛПВП.

Допустимый уровень коэффициента атерогенности соответствует определенному возрастному диапазону.

  • 2,0–2, 8. Такие цифры должны быть у людей в возрасте до 30 лет.
  • 3,0–3,5. Эти значения являются целевым уровнем нормы у людей старше 30, у которых нет ни лабораторных, ни клинических признаков атеросклеротического процесса.
  • Выше 4. Этот показатель считается высоким. Он свойственен пациентом с диагнозом ишемической болезни сердца.
Читайте также:  Зерна липидов это

Согласно международным критериям, липидный обмен веществ приближен к норме при следующих референсных значениях:

  • общий холестерол – до 5 ммоль/л,
  • триглицериды – до 2,
  • ЛПНП – до 3,
  • ЛПВП – от 1,
  • коэффициент атерогенности – до 3 единиц.

Нужно учитывать, что норма холестерола – залог здоровой сосудистой системы. Поэтому нужно приложить максимум усилий, чтобы стабилизировать и улучшить свой липидный профиль.

Сделать это можно с помощью сбалансированной гипохолестериновой диетотерапией. В ней должно быть уменьшено количество животных жиров, преимущественно вареные блюда вместо жаренных, больше свежих овощей и фруктов. Диета при повышенном холестерине хорошо сочетается с активным стилем жизни, дозированными физическими нагрузками – утренней гимнастикой, пробежками. Когда холестерин повышен более ощутимо, то для достижения большего эффекта, доктором подбирается необходимая медикаментозная терапия, назначаются препараты из групп статинов или фибратов.

Уровень холестерола в крови – важный индикатор здоровья организма. Когда его значения начинают превышать пределы нормы, возрастает риск развития заболеваний сосудистой системы и сердца – атеросклероза, инсультов и инфарктов.

Первые стадии такого процесса не имеют внешних признаков и распознать их можно только по анализам. Поэтому очень важно регулярно сдавать профилактические липидограммы и вовремя принимать меры, ведь чем раньше будет начато лечение, тем благоприятнее прогноз на выздоровление. После получения результатов, следует проконсультироваться с профильным специалистом, который порекомендует необходимые меры и назначит индивидуальную терапию.

Источник: holestein.ru

Инструкция по применению набора реагентов для количественного определения содержания холестерина в сыворотке или плазме крови человека «Холестерин — UTS»

по применению набора реагентов для количественного определения содержания холестерина в сыворотке или плазме крови человека

Набор «ХОЛЕСТЕРИН — UTS» разрешен к производству, продаже и применению на территории РФ.

Регистрационное удостоверение № ФСР 2009/05463

Информация для заказа набора «ХОЛЕСТЕРИН — UTS»

реагент 100 мл + калибратор 1 мл

реагент 400 мл + калибратор 4 мл

*v – объем фотометрической ячейки анализатора.

1. НАЗНАЧЕНИЕ

1.1. Набор реагентов «ХОЛЕСТЕРИН — UTS» предназначен для определения содержания общего холестерина в сыворотке и плазме крови человека ферментативным методом в клинико-диагностических и биохимических лабораториях для целей диагностики заболеваний и контроля проводимого лечения пациентов.

1.2. Холестерин является компонентом клеточных мембран, предшественником стероидных гормонов и желчных кислот. Содержание холестерина в крови повышается при заболеваниях таких как: гиперлипопротеинемия, полигенная гиперхолестеринемия злокачественных опухолей поджелудочной железы, алкоголизме [1]. Снижение уровня холестерина отмечено при дефиците a-липопротеинов, гипертиреозе, недостаточности питания [1]. Определение уровня холестерина используется при диагностике нарушений липидного обмена, а также при выявлении факторов риска атеросклероза и ишемической болезни сердца. На этом основано клиническое значение анализа.

1.3. Потенциальный риск применения набора – класс 2а. Основной риск косвенный и связан с возможностью получения неверного результата анализа, что может привести к неправильно поставленному диагнозу и назначению неэффективного лечения пациента. Для снижения указанного риска необходимо в каждой аналитической серии контролировать качество результатов анализов с применением контрольных сывороток в соответствии с ОСТ 91500.13..

2. ПРИНЦИП МЕТОДА

2.1. Определение холестерина основано на катализируемом ферментами последовательном превращении эфиров холестерина в холестенон и перекись водорода (1,2). Перекись водорода окисляет субстраты пероксидазы с образованием окрашенного продукта (3), интенсивность окраски которого прямо пропорциональна концентрации холестерина в образце и измеряется фотометрически при длине волны 505 нм [2,3,4].

Эфиры-Холестерина + H2O Холестеринэстераза Холестерин + Жирные кислоты (1)

Холестерин + О2 Холестериноксидаза Холестенон + Н2О2 (2)

2Н2О2 + 4-Аминоантипирин + Фенол Пероксидаза Хлорфенол + Хинонимин + 4Н2О (3)

2.2. Фотометрическое измерение основано на наличии пика поглощения с максимумом при длине волны 505 нм молекулами хинонимина. Все остальные компоненты реакционной смеси слабо поглощают свет при этой длине волны. Таким образом, увеличение оптической плотности реакционной смеси пропорционально интенсивности окраски хинонимина и, следовательно, прямо пропорционально концентрации холестерина в пробе.

3. СОСТАВ НАБОРА

3.1. Набор реагентов «ХОЛЕСТЕРИН — UTS» поставляется в виде двух растворов: Реагента и калибратора.

Источник: pandia.ru